天青蛋白與p53蛋白共同作用誘發(fā)癌細(xì)胞及耐藥癌細(xì)胞凋亡.pdf

1、天青蛋白是由假單胞桿菌綠毒素分泌的一種細(xì)胞蛋白，屬于低分子量、可溶性的含銅蛋白，因此稱其為銅藍(lán)蛋白。以前的研究集中于天青蛋白在細(xì)胞氧化呼吸鏈中的作用，這種作用與其具有的氧化還原能力相關(guān)。但是最近幾年發(fā)現(xiàn)天青蛋白可以與腫瘤抑制蛋白p53形成復(fù)合物，穩(wěn)定和提高p53在胞內(nèi)的水平，同時(shí)產(chǎn)生高水平的活性氧ROS，由此導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。已有文獻(xiàn)報(bào)道azurin能夠抑制裸鼠網(wǎng)狀瘤J774巨噬細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)黑色素瘤UISO-Mel-2細(xì)胞及人乳腺癌的MC

2、F-7細(xì)胞凋亡。 為了解天青蛋白對(duì)中國(guó)人的口腔癌細(xì)胞及順鉑(DDP)耐藥細(xì)胞的作用，本研究成功利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)高效表達(dá)了綠膿桿菌氧化還原蛋白天青蛋白，采用兩種方法分別純化得到了純度較高的可溶性天青蛋白，以變性丙稀酰胺電泳和FPLC系統(tǒng)檢測(cè)其純度，在理化性質(zhì)上給予表征，將其作用于乳腺癌MCF-7細(xì)胞，檢測(cè)天青蛋白的促凋亡能力和細(xì)胞毒性，證實(shí)其細(xì)胞毒活性。而后我們將天青蛋白作用于可以表達(dá)野生型p53蛋白的兩種口腔癌細(xì)胞Acc2,

3、Acc3，并通過(guò)MTT毒性實(shí)驗(yàn)，流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)和瓊脂糖凝膠電泳研究其促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，同時(shí)通過(guò)免疫印記實(shí)驗(yàn)考察其與p53的相互作用。結(jié)果表明，天青蛋白的加入穩(wěn)定和提高了細(xì)胞內(nèi)p53的表達(dá)，對(duì)口腔癌細(xì)胞產(chǎn)生了明顯的生長(zhǎng)抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證實(shí)其對(duì)順鉑(DDP)耐藥的A549肺癌細(xì)胞的凋亡也起到很明顯的促進(jìn)作用。這揭示了azurin在腫瘤生物治療方面的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步研究其生物功能及在治療腫瘤方面尤其是在耐藥腫瘤細(xì)