溶藻膠弧菌rpoS基因突變菌株的構建及其特性研究.pdf

1、溶藻膠弧菌(Vibrio alginolyticus)是一種條件致病菌，它能感染人類和海洋動物。自然界中的細菌能夠適應各種各樣的不利環(huán)境，并且能在一定條件下進入活的非可培養(yǎng)(VBNC)狀態(tài)。rpoS基因編碼RpoS因子，是細菌穩(wěn)定期一個調控因子，當細菌進入穩(wěn)定期時，RpoS因子能夠增強細胞對外界不良環(huán)境的抗逆性和適應能力。本論文目的是研究RpoS因子在溶藻膠弧菌處于惡劣環(huán)境中或誘導其進入VBNC狀態(tài)過程中的作用。首先克隆了溶藻膠弧菌VI

2、B283的rpoS基因，利用同源重組構建了該菌rpoS基因的突變菌株。通過對突變菌株和野生菌株的比較發(fā)現(xiàn)，在正常條件下培養(yǎng)，野生株和突變株都能很好的在2216E液體培養(yǎng)基中生長，但突變株的最終細菌濃度是野生株濃度的1/2。突變菌株對過氧化氫的應答敏感，兩菌的存活率差異顯著，而在高滲透壓條件下，兩株菌的存活率沒有明顯差異。將細菌寡營養(yǎng)條件下培養(yǎng)12天后，野生菌株的活菌數(shù)為原來的53.50％，突變株為原來的1.96％，兩菌差異顯著。在4℃寡