腹瀉型腸易激綜合征患者結(jié)腸異常表達(dá)蛋白質(zhì)的篩選及鑒定.pdf

1、背景與目的：腸易激綜合征(irritablebowelsyndrome，IBS)是常見的功能性腸病，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。已提出的有胃腸動力異常機(jī)制，內(nèi)臟敏感性改變機(jī)制，腦腸相互作用機(jī)制，腸道內(nèi)分泌細(xì)胞異常機(jī)制等等，但是所有的這些機(jī)制均不能解釋IBS的全部表現(xiàn)。本研究著眼于一切生命活動的直接執(zhí)行體—蛋白質(zhì)的改變，旨在從蛋白質(zhì)水平發(fā)現(xiàn)腹瀉型IBS(D-IBS)患者結(jié)腸發(fā)生的異常改變，揭示IBS出現(xiàn)各種臨床癥狀的可能原因。 材料與方法

2、：D-IBS患者4例，診斷均符合功能性胃腸病羅馬Ⅱ診斷標(biāo)準(zhǔn)，男女各半作為實(shí)驗(yàn)組，健康志愿者4例作為對照組。分別在進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查時(shí)，直視下于回肓部及乙狀結(jié)腸處活檢3塊，立即置于含0.1％苯甲基磺酰氟(PMSF)的冰鹽水中洗凈，液氮中保存。(離體后10分鐘內(nèi)完成)。提取標(biāo)本蛋白后，按照G(o)rgA的方法進(jìn)行雙向凝膠電泳。一向等電聚焦，按照等電點(diǎn)的不同將蛋白提取液在水平方向進(jìn)行一維分離，二向十二烷基磺酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAG

3、E)對蛋白提取液按照分子量不同在垂直于等電聚焦方向上進(jìn)行第二維分離。采用考馬斯亮藍(lán)染色法對于凝膠進(jìn)行顯色固定，掃描儀獲取圖像。使用ImageMaster2DElite軟件對圖像進(jìn)行分析配比，篩選出在D-IBS組表達(dá)有明顯差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)；選取差異最明顯而且與其它蛋白點(diǎn)易于分離的點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，鑒定出的蛋白在專業(yè)網(wǎng)站檢索其功能。 結(jié)果：利用雙向電泳技術(shù)成功得到人結(jié)腸粘膜組織的蛋白質(zhì)組圖譜，正常對照組2-DE圖譜得到平均蛋白點(diǎn)336個

4、，組間圖像平均匹配率91.83％，D-IBS組2-DE圖譜得到平均蛋白點(diǎn)426個，組間圖像平均匹配率94.60％。D-IBS組與正常對照組之間平均膠進(jìn)行比較，兩組間匹配率為74％，發(fā)現(xiàn)Volume值改變≥2.0倍以上的點(diǎn)共24個，其中21個點(diǎn)表達(dá)上調(diào)，3個點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。分別選擇其中表達(dá)上調(diào)及下調(diào)最明顯的2個點(diǎn)，共4個進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，表達(dá)上調(diào)的蛋白經(jīng)鑒定為免疫球蛋白J鏈(ImmunoglobulinJchain)和熱休克蛋白27(heatsh

5、ockprotein27)，表達(dá)下調(diào)的蛋白點(diǎn)為血紅蛋白β亞基(Hemoglobinbetasubunit)和果糖二磷酸醛縮酶A(Fructose-bisphosphatealdolaseA)。 結(jié)論：用雙向電泳的方法可以得到人結(jié)腸蛋白質(zhì)組的表達(dá)圖譜；D-IBS患者出現(xiàn)的臨床癥狀可能與結(jié)腸一些蛋白表達(dá)水平的上調(diào)或下調(diào)有關(guān)，這些蛋白包括免疫球蛋白J鏈(ImmunoglobulinJchain)，熱休克蛋白27(heatshockpr