腹瀉型腸易激綜合征患者結(jié)腸黏膜蛋白質(zhì)的篩選與鑒定.pdf

1、[背景與目的]：腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)是常見的功能性腸病，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。已提出的有胃腸動力異常，內(nèi)臟敏感性改變，腦-腸相互作用、神經(jīng)免疫內(nèi)分泌失調(diào)等機(jī)制，但什么細(xì)胞及分子參與IBS的機(jī)制尚不清楚。細(xì)胞或器官功能的異常必然有其物質(zhì)的基礎(chǔ)，蛋白質(zhì)是生命活動的基礎(chǔ)，本研究應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法，尋找腹瀉型IBS(IBS withdiarrhea，IBS-D)患者和正常人結(jié)腸黏膜的差異表達(dá)蛋白

2、質(zhì)，旨在篩選出對IBS-D發(fā)病起重要作用的蛋白質(zhì)，揭示IBS-D的分子機(jī)制。 [材料與方法]：IBS-D患者5例，診斷均符合功能性胃腸病羅馬Ⅲ科研診斷標(biāo)準(zhǔn)，健康志愿者5例為對照組。分別在進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查時(shí)，直視下于盲腸及乙狀結(jié)腸粘膜各活檢4塊；3塊立即置于含0.1％苯甲基磺酰氟的冰鹽水中洗凈，液氮中保存；1塊于福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋。將兩部位液氮標(biāo)本等量混合，提取組織總蛋白后，進(jìn)行雙向凝膠電泳。采用銀染法對凝膠進(jìn)行顯色固定，

3、掃描儀獲取圖像。使用Image Master2D Elite軟件對圖像進(jìn)行分析，篩選出在IBS-D組表達(dá)有明顯差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)；選取顯示清晰的10個(gè)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定；應(yīng)用Western blot和免疫組織化學(xué)方法對其中一種蛋白質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。 [結(jié)果]：健康對照組2-DE圖譜得到1504±69個(gè)蛋白點(diǎn)，IBS-D組顯示1356±104個(gè)蛋白點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)Volume值改變=2.0倍以上的點(diǎn)共41個(gè)，其中11個(gè)點(diǎn)表達(dá)上調(diào)，30個(gè)點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。分別

4、選擇其中表達(dá)上調(diào)及下調(diào)明顯的5個(gè)點(diǎn)，進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，表達(dá)上調(diào)的蛋白經(jīng)鑒定為線粒體ATP合酶d亞基、硫轉(zhuǎn)移酶1A3/1A4、細(xì)胞質(zhì)乙酰輔酶A乙?；D(zhuǎn)移酶、硫氧還蛋白和醛脫氫酶2；表達(dá)下調(diào)的蛋白為免疫球蛋白kappa鏈(immunoglobulin kappa chain，Igk)、異丁酰輔酶A脫氫酶、WDR1蛋白、T復(fù)合物蛋白1a亞單位和烯醇化酶a。應(yīng)用Western blot方法對上述5例IBS-D患者和5例健康對照組的結(jié)腸黏膜的Ig k

5、和Igλ進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)兩組Ig k存在顯著性差異，IBS-D組含量明顯低于對照組(P＜0.05)；Igλ無顯著性差異(P＞0.05)。對滿足羅馬Ⅲ科研標(biāo)準(zhǔn)的24例IBS-D患者和19例健康對照的盲腸和乙狀結(jié)腸黏膜標(biāo)本的Ig k和Igλ免疫組織化學(xué)染色顯示，粘膜固有層漿細(xì)胞、腺泡間質(zhì)、小血管壁及上皮基底膜表達(dá)Ig k和Igλ；兩組Ig k存在顯著性差異(P＜0.05)，IBS-D組表達(dá)減弱；Igλ差異不明顯。 [結(jié)論]：IBS-D