捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體在各期梅毒的診斷及療效觀察方面的臨床應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　 梅毒是由梅毒螺旋體(Treponema pallidum,TP)引起的一種性傳播疾病,其主要通過性行為和血液傳播,也可通過胎盤母嬰垂直傳播。近年來我國的梅毒發(fā)病率有逐年上升的趨勢。梅毒患者是梅毒的惟一傳播源,對梅毒進(jìn)行早診斷、早治療是控制其蔓延至關(guān)重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。梅毒螺旋體可侵犯全身各臟器,造成多器官病變、功能失常、組織破壞,甚至死亡,對人們的健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。由于梅毒螺旋體具有較強(qiáng)的傳染性和病程的復(fù)雜性,且梅

2、毒在早、中期臨床表現(xiàn)不顯著,常常造成病人對病情的忽視,給病人身體健康帶來極大的危害,也使梅毒的傳播更為加快。
　　 血清學(xué)檢測是診斷梅毒的重要實(shí)驗(yàn)室檢測方法。目前梅毒的血清學(xué)檢測方法主要有兩種:一類是非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn),如快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)等,此類試驗(yàn)檢測的是心磷脂抗體,為非特異性抗體檢測試驗(yàn),常用作梅毒的篩查試驗(yàn),亦可用于梅毒的療效觀察、復(fù)發(fā)及再感染。由于此類實(shí)驗(yàn)受

3、多種因素影響,常出現(xiàn)生物學(xué)假陰性和假陽性結(jié)果,對一、三期梅毒的陽性率不高,因此僅適于二期梅毒的診斷,而不適于診斷一、三期梅毒,包括潛伏梅毒、神經(jīng)梅毒的診斷。作療效觀察時(shí),常出現(xiàn)血清學(xué)固定,使臨床醫(yī)生難以判斷治療終點(diǎn)。另一類是梅毒螺旋體抗原血清實(shí)驗(yàn),如梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)、熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)(FTA-ABS)、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)等,這類試驗(yàn)的敏感性高、特異

4、性強(qiáng),臨床常用此類試驗(yàn)作為梅毒的確認(rèn)試驗(yàn)。但是此類試驗(yàn)檢測的是梅毒螺旋體IgG抗體和IgM抗體,而IgG抗體長期存在,血清反應(yīng)持續(xù)存在陽性,不能用作梅毒治療的療效觀察。因此迫切需要尋求一種敏感性高、特異性強(qiáng)的梅毒早期檢測方法,為臨床早期診斷、早期治療及驅(qū)梅治療后的療效觀察提供確切的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 抗梅毒螺旋體IgM抗體是梅毒感染最早產(chǎn)生的抗體,患者一般感染后兩周即可從血清中測出,因此是梅毒早期感染并活動的標(biāo)志。經(jīng)有效治療后Ig

5、M抗體消失,晚期潛伏梅毒患者出現(xiàn)IgM抗體陽性,需要考慮是否再感染或體內(nèi)未清除病灶再燃的情況。此外,TP-IgM抗體對診斷先天性梅毒和神經(jīng)梅毒具有重要意義.由于IgM抗體的分子量較大,不能透過胎盤屏障和血腦屏障等天然屏障,如若在新生兒血液中或成人腦脊液中檢測到TP-IgM抗體,則可診斷先天性梅毒或神經(jīng)性梅毒。目前認(rèn)為TP-IgM抗體測定可用于:①梅毒的早期診斷；②梅毒治療后的療效觀察；③梅毒復(fù)發(fā)或再感染的判斷；④新生兒胎傳梅毒的診斷；⑤

6、神經(jīng)梅毒的診斷。本研究旨在探討各期梅毒患者血清抗梅毒螺旋體IgM抗體的檢測情況和臨床意義,并評價(jià)捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體對各期梅毒治療后的隨訪意義。
　　 隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)和基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展,隨著基因工程技術(shù)制備梅毒螺旋體特異蛋白抗原的成功,TP-IgM抗體檢測已經(jīng)逐漸應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室診斷中。但是目前各實(shí)驗(yàn)室對捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體檢測方法應(yīng)用于臨床的評估較少,并且我國學(xué)者對TP-IgM抗體在療

7、效觀察方面的研究開展的也較少。本實(shí)驗(yàn)通過大量的臨床樣本驗(yàn)證了捕獲法ELISA檢測對早期梅毒的診斷具有較高的靈敏度和特異性,在療效觀察方面優(yōu)于RPR,是一種良好的早期梅毒診斷和療效觀察的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo),為我國日趨嚴(yán)峻的梅毒防治工作的改善奠定理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 材料與方法
　　 一、實(shí)驗(yàn)材料
　　 本實(shí)驗(yàn)所有標(biāo)本均來自沈陽市第六人民醫(yī)院性病門診患者血清；
　　 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)試劑盒購自上

8、海榮盛生物技術(shù)有限公司:
　　 梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)試劑盒購自日本富士株式會社；
　　 梅毒螺旋體IgM抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)試劑盒由北京熱景生物有限公司提供；
　　 高速離心機(jī)(Sigma,USA):
　　 酶標(biāo)儀(BIO-RAD Model 680)；
　　 洗板機(jī)(BIO-RAD Model 1575 Immun Wash)；
　　 電熱恒溫培養(yǎng)箱(D

9、RP-9082,上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司公司)；
　　 微樣加樣器(Eppendor,German)。
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法
　　 1、收集患者血清樣本。
　　 2、采用快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)和梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)檢測初診未治療患者血清,進(jìn)行篩查和確認(rèn)。
　　 3、采用捕獲法ELISA檢測初診梅毒患者梅毒螺旋體IgM抗體,并與TPPA相比較。
　　 4、對TP-IgM陽性

10、患者,于正規(guī)驅(qū)梅治療1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月后分別采用RPR及捕獲法ELISA跟蹤監(jiān)測,進(jìn)行療效評估,分析兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。
　　 結(jié)果：
　　 1、TP-IgM檢測陽性率在二期梅毒組中最高,可達(dá)100％；其次是一期梅毒,陽性率為70.8％,結(jié)果經(jīng)卡方檢驗(yàn),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩期合并的陽性率為90.4％。在潛伏期梅毒捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體的陽性率僅為23.3％,顯著低于早期梅毒(X2=12.42,P

11、<0.05)。10例類風(fēng)濕因子陽性患者血清無1例發(fā)現(xiàn)陽性。
　　 2、一期梅毒和二期梅毒中,捕獲法ELISA 和TPPA法,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在潛伏期梅毒TPPA、捕獲法ELISA的敏感性分別是98.8％、30.2％,捕獲法ELISA檢測的敏感性明顯低于TPPA的敏感性,差異有顯著性(X2=120.56,P<0.05)。
　　 3、經(jīng)規(guī)范驅(qū)梅治療后,一期梅毒、二期梅毒、潛伏期梅毒的捕獲法ELISA在12個(gè)

12、月后的陰轉(zhuǎn)率分別為100％、91.6％、50％。而RPR的陰轉(zhuǎn)率分別為92.8％、83.3％、46.1％。在隨訪過程中發(fā)現(xiàn),捕獲法ELISA的轉(zhuǎn)陰要早于RPR法,并且不會出現(xiàn)血清學(xué)固定。
　　 總之,捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體敏感性高、特異性好,是早期梅毒檢測較為理想的檢測指標(biāo)。在用于梅毒的療效觀察時(shí),轉(zhuǎn)陰時(shí)間早于RPR,也不會出現(xiàn)血清學(xué)固定,對治療終點(diǎn)的判斷可靠,在一定程度上要優(yōu)于RPR。
　　 結(jié)論：