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1、南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文尤文肉瘤EWSFLI1基因原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定姓名：陳文昭申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：黃山虎20100601Objective：AbstractABSTRACTToconstructEwing’SsarcomaEWS—FLI1geneprokaryoticexpressionvectorMethods：。ThetargetgeneofEWSFLI1wasobtainedbyRTPCRmethod
2、afterthetotalRNAwasextractedfromEwing’SsarcomaA673cellsThesitesequencesofrestrictiveendonucleaseSacIandHind111wereintroducedintotheupstreamanddownstreamoftargetgenerespectivelyThetargetgenefragmentwereclonedintopMD18Tand
3、transformedintoEColiJM109ScreenedpositiveclonesWereconfirmedbyPC&restrictiveendonucleasedigestionandDNAsequencingTheEWSFLI1genewassequentiallysubclonedintoprokaryoticexpressionvectorpQE30，andtherecombinantplasmidpQE30EWS
4、FLI1wasconfirmedbyrestrictiveendonucleasedigestionandDNAsequencingTheproteins，expressedinEcoliJM109transformedwithEWS—FLI1recombinantplasmidunderIPTGinduction，werecharacterizedbySDS—PAGEandWesternblotResult：PCRresultindi
5、catedthatanamplifiedDNAfragmentWasinsizeof15kbRestrictiveendonucleasedigestionanalysisindicatedthatthetargetgeneWasinsizeof15kbDNAsequencinganalysisdemonstratedthatsequenceoftargetgeneaccordedwithanticipatedoneTheEWSFLI1
6、withamolecularweightof54kDaWaShii曲iyexpressedinpQE30EWSFLI!WesternblotprovedthatthemolecularmassofexpressedproductaccordedwiththeoneofEWSFLllConclusion：TherecombinantprokaryoticexpressionvectorpQE30EWSFLI1Wasconstructeds
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