核磷蛋白1在小鼠早期妊娠子宮中的表達與調(diào)節(jié).pdf

1、胚胎著床是一個復雜的生理過程，包括活化的胚胎黏附到處于接受態(tài)的子宮腔上皮，胚胎滋養(yǎng)層細胞侵入子宮基質(zhì)細胞，以及基質(zhì)細胞發(fā)生蛻膜化等一系列生理反應。核磷蛋白1(Npm1)是細胞核仁區(qū)的主要磷酸化蛋白，具有分子伴侶功能，能穿梭于核質(zhì)間，參與核糖體的合成和中心體的復制，通過多種途徑調(diào)控細胞增殖與凋亡。本實驗利用原位雜交、Real-time PCR、Western blot、流式細胞術和熒光素酶分析等方法，對Npm1在小鼠早妊娠子宮中的表達、調(diào)

2、節(jié)及功能進行深入研究。小鼠早期妊娠第2天，在子宮腔上皮和腺上皮開始出現(xiàn)較弱的Npm1 mRNA信號。第3-4天時在基質(zhì)細胞出現(xiàn)較強Npm1 mRNA信號，至第5天時Npm1 mRNA在著床點信號最強，到第6-8天時Npm1 mRNA信號變?nèi)?。Rea1-time PCR定量分析結(jié)果也與上述原位雜交結(jié)果基本一致。在卵巢切除的小鼠子宮中，孕酮處理可上調(diào)Npm1 mRNA和蛋白的表達，使用孕酮受體拮抗劑(RU486)可以抑制孕酮對Npm1的上調(diào)

3、作用。對體外培養(yǎng)的小鼠子宮基質(zhì)細胞進行孕酮和RU486的處理，也得到與體內(nèi)一致的結(jié)果。上述結(jié)果說明孕酮可以通過其核受體PR誘導Npm1的表達。此外，在體外培養(yǎng)的小鼠子宮基質(zhì)細胞中過表達Npm1可使細胞增殖活性和有絲分裂能力明顯增強。用Npm1活性抑制劑NSC348884處理基質(zhì)細胞，可使細胞增殖能力顯著下降。給妊娠第5天小鼠注射NSC348884可明顯減輕著床點的子宮重量。這些結(jié)果說明，Npm1在胚胎著床的細胞增殖過程中發(fā)揮重要作用。在

4、體外誘導蛻膜化過程中，Npm1 mRNA和蛋白表達明顯下調(diào)，同時cAMP反應元件結(jié)合蛋白(CREB)的活化形式——磷酸化CREB(p-CREB)的表達水平顯著升高。單獨用cAMP處理子宮基質(zhì)細胞，可下調(diào)Npm1 mRNA和蛋白的表達。通過預測分析，在Npm1基因的啟動子序列上存在CREB結(jié)合序列，并進一步證實cAMP對Npm1具有調(diào)節(jié)作用。給妊娠第8天小鼠子宮中注射NSC348884，可使子宮蛻膜區(qū)基質(zhì)細胞的多倍體率顯著上升，說明Npm