血府逐瘀湯加減黃芪在缺氧缺血性腦病中的保護(hù)作用.pdf

1、背景:缺氧缺血性腦病是目前嬰幼兒致殘致死的主要原因，中醫(yī)認(rèn)為缺氧過程導(dǎo)致氣血運(yùn)行不暢從而產(chǎn)生血瘀，進(jìn)而產(chǎn)生氣滯，一般采用西醫(yī)治療的基礎(chǔ)上進(jìn)行中醫(yī)活血化瘀治療。中西醫(yī)治療中重型新生兒缺氧缺血性腦病是發(fā)展方向，國(guó)人對(duì)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的需求進(jìn)一步起了推動(dòng)作用。研究發(fā)現(xiàn)，活血化瘀治療能夠改善腦微循環(huán)，阻滯神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和壞死，但對(duì)益氣益血治療對(duì)神經(jīng)細(xì)胞康復(fù)的作用并沒有深入研究?，F(xiàn)代神經(jīng)病理學(xué)研究證實(shí)，急性缺氧導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的乳酸堆積、鈉鉀泵的衰竭，細(xì)胞變

2、性壞死，大量細(xì)胞因子釋放，它們之間的相互作用促使神經(jīng)組織的修復(fù)愈合。本實(shí)驗(yàn)是測(cè)量其中代表性的細(xì)胞因子神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nevergrowth factor，NGF)含量的差異，試圖尋找益氣活血治療與內(nèi)源性細(xì)胞因子之間的關(guān)聯(lián)性，來揭示中藥促進(jìn)神經(jīng)組織修復(fù)的機(jī)理，了解其對(duì)中長(zhǎng)期神經(jīng)功能康復(fù)的作用，指導(dǎo)臨床中藥治療。 研究對(duì)象與方法: 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：清潔級(jí)健康SD大鼠80只，斷奶2周，體重約100g，雌雄各半。分成5組，每組16只，每

3、個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察處理8只。 手術(shù)組采用結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法，在SD大鼠上建立腦缺氧缺血模型。術(shù)后分別對(duì)其進(jìn)行生理鹽水(模型組)、血府逐瘀湯(中藥1組)、每劑血府逐瘀湯加10g黃芪(中藥2組)和每劑血府逐瘀湯加40g黃芪(中藥3組)灌胃。觀察四組SD大鼠在術(shù)后1d和6d的神經(jīng)學(xué)行為，采用Zea Longa．神經(jīng)功能評(píng)分法評(píng)分，予以斷頭取腦，光鏡下觀察腦組織HE染色的病理改變及熒光定量RT-PCR檢測(cè)腦組織內(nèi)NGF mRNA的含量。假

4、手術(shù)組手術(shù)方法同實(shí)驗(yàn)組，區(qū)別是只分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈而不予結(jié)扎，術(shù)后分別進(jìn)行生理鹽水(對(duì)照組)灌胃。觀察假手術(shù)組SD大鼠在術(shù)后1d和6d的神經(jīng)學(xué)行為，采用Zea Longa神經(jīng)功能評(píng)分法評(píng)分，予以斷頭取腦，光鏡下觀察腦組織HE染色的病理改變及熒光定量RT-PCR檢測(cè)腦組織內(nèi)NGF mRNA的含量。 數(shù)據(jù)處理：采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，成

5、組配對(duì)的兩樣本比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)組間比較采用秩和檢驗(yàn)Kruska-Wallis法，成組配對(duì)的兩樣本比較采用Mann-whithey檢驗(yàn)。結(jié)果均以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1.神經(jīng)學(xué)行為改變：術(shù)后第1天，手術(shù)組納入實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能障礙，中藥各組與模型組比較無顯著差異，手術(shù)組與假手術(shù)組比較有顯著差異(P<0。05)，第6天，中藥各組與模型組比較有明顯改善(P<0.05)，中藥各組間無顯著差異

6、。與術(shù)后第1天比較，術(shù)后第6天模型組神經(jīng)功能無明顯改善，中藥各組神經(jīng)功能改善明顯(P<0.05)。假手術(shù)后對(duì)照組神經(jīng)功能正常，評(píng)分為0分。 2.腦組織HE染色光鏡下病理改變：手術(shù)組大鼠第1天病理表現(xiàn)相似，均出現(xiàn)缺氧缺血性腦損傷后的典型改變：皮質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞增生：海馬區(qū)神經(jīng)元皺縮，空泡化，尼氏體減少或消失，胞核碎裂；腦組織間質(zhì)水腫；血管管腔變窄，淤血，周圍間質(zhì)增大；梗死區(qū)神經(jīng)纖維空泡化明顯。術(shù)后6d時(shí)，模型組大鼠腦組織病理改變無明顯

7、改善，中藥處理組改善明顯，基本為神經(jīng)元恢復(fù)性改變。假手術(shù)組顯示神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，未見明顯的病理性損傷。 3.熒光定量RT-PCR檢測(cè)腦組織內(nèi)NGF mRNA含量，所得結(jié)果以NGF與各自β-actin PCR Ct值之差值表示。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示．術(shù)后第1天中藥1、2組和模型組之間無顯著差異，中藥3組和模型組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各手術(shù)組與假手術(shù)組有顯著差異(P<0.05)；術(shù)后第6天三組中藥處理組與模型組比較均有顯著差異(P<0.

8、05)，與假手術(shù)組比較也有顯著差異(P<0.05)，各中藥處理組間差異無顯著意義，模型組與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后第6天與第1天比較，模型組NGF表達(dá)有明顯減少(P<0.05)，其他各組差異不顯著。 結(jié)論： 1.血府逐瘀湯灌胃能明顯改善大鼠缺氧缺血性腦損傷后的神經(jīng)行為學(xué)和腦組織病理學(xué)改變。 2.血府逐瘀湯不加黃芪、血府逐瘀湯加10g黃芪和血府逐瘀湯加40g黃芪灌胃均能明顯增強(qiáng)大鼠缺氧缺血性腦損傷后腦組織