奧美沙坦酯對高糖培養(yǎng)的人腎系膜細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf

1、糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病最常見、最嚴(yán)重的慢性微血管并發(fā)癥之一，是糖尿病患者的主要死亡原因。DN最早的病理學(xué)改變是腎小球肥大、腎小球基底膜增厚以及細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）積聚，這些均可以引起腎小球超濾過及微量蛋白尿。ECM主要產(chǎn)生在腎小球系膜細(xì)胞，后者在DN的腎小球硬化中起關(guān)鍵作用。既往研究表明，高糖是DN的始動因素，可引起氧化應(yīng)激（oxidative st

2、ress，OS）。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）是體內(nèi)重要的抗氧化酶，可間接反映氧自由基的清除能力。丙二醛（malondialdehyde，MDA）是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，可直接反映脂質(zhì)過氧化的速度和強(qiáng)度。這3個指標(biāo)的檢測有助于綜合評價氧化應(yīng)激水平。高糖、氧化應(yīng)激可刺激細(xì)胞增殖相關(guān)因子，如轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factors，TG

3、F-β1）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）產(chǎn)生，參與DN的發(fā)生發(fā)展。已經(jīng)證實TGF-β1是最主要的致纖維化生長因子，在腎小球硬化和間質(zhì)纖維化發(fā)揮重要作用；VEGF在調(diào)節(jié)腎小球通透性方面起重要作用，病理狀態(tài)下，它可促進(jìn)系膜細(xì)胞增殖、ECM積聚，介導(dǎo)DN蛋白尿的產(chǎn)生。奧美沙坦酯（olmesartan medoxomil，OLM）是一種新型非競爭性、高選擇性的非肽類血管緊張素

4、Ⅱ1型受體（AngiotensinⅡ type1receptor，AT1）拮抗劑，新近研究表明本品有腎臟保護(hù)作用，其在DN發(fā)生發(fā)展中的腎臟保護(hù)作用及機(jī)制越來越受到人們的關(guān)注。 目的：觀察奧美沙坦酯對高糖狀態(tài)下人腎系膜細(xì)胞增殖及相關(guān)生長因子TGF-β1、VEGF表達(dá)的影響及對細(xì)胞氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響，進(jìn)一步探討奧美沙坦酯的腎臟保護(hù)作用及機(jī)制。 方法：正常成年人腎小球系膜細(xì)胞（human renal mesangial cel

5、ls，HRMCs）購于美國Sciencell公司。體外高糖培養(yǎng)HRMCs，取5-8代用于實驗。實驗分4組：1.低糖組（glucose5.6 mmol/1）。2.高糖組（glucose30 mmol/l）。3.低糖+DMSO（glucose5.6 mmol/l+DMS02×10-5 mmol/l，LG+H-DMSO）組。4.高糖+奧美沙坦酯干預(yù)組，以低（HG+L-OLM）、中（HG+M-OLM）、高（HG+H-OLM）3組（OLM終濃度分

6、別為2×10-7 mmol/l、2×10-6 mmol/l、2×10-5 mmol/l）奧美沙坦酯濃度干預(yù)48 h；以奧美沙坦酯（終濃度2×10-6 mmol/l）分別干預(yù)24 h，48 h。用比色法檢測細(xì)胞上清中SOD、CAT的活性及MDA水平；以MTT方法觀察細(xì)胞增殖；以ELISA方法檢測細(xì)胞上清中TGF-β1、VEGF的含量；以RT-PCR方法檢測細(xì)胞TGF-β1、VEGF mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果： 1.腎小球系

7、膜細(xì)胞在高糖環(huán)境的刺激下，細(xì)胞明顯增殖：細(xì)胞上清中SOD、CAT活性顯著下降，MDA含量明顯升高。同時，腎小球系膜細(xì)胞TGF-β1、VEGF mRNA和蛋白表達(dá)明顯上調(diào)。上述趨勢在24 h可見，48 h顯著增強(qiáng)。 2.LG+H-DMSO組分別在各時間點與低糖組對比，可見DMSO（2×10-5mmol/l）對正常HRMCs生存無影響。 3.高糖環(huán)境中的腎小球系膜細(xì)胞經(jīng)奧美沙坦酯干預(yù)后，細(xì)胞增殖明顯受抑制，并呈藥物濃度依賴性

8、。 4.高糖環(huán)境中的腎小球系膜細(xì)胞經(jīng)奧美沙坦酯干預(yù)后，SOD、CAT活性升高，MDA含量下降，并呈藥物濃度依賴性。 5.高糖環(huán)境中的腎小球系膜細(xì)胞經(jīng)奧美沙坦酯干預(yù)后，TGF-β1、VEGF mRNA和蛋白表達(dá)下降，并呈藥物濃度依賴性。 結(jié)論：高糖可誘導(dǎo)系膜細(xì)胞ROS產(chǎn)生增多，抗氧化酶活力下降。奧美沙坦酯可能通過抑制高糖所致的系膜細(xì)胞ROS產(chǎn)生增多及增加抗氧化酶活性，從而抑制增殖相關(guān)細(xì)胞因子VEGF、TGF-β1