2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、將帶有目的基因H1-EGF拷貝數(shù)分別為1,2,3的質(zhì)粒MFLI-K,MFLII-K,MFLIII-K用Sa1I或BGLII酶切以使線(xiàn)性化.線(xiàn)性化的質(zhì)粒用于轉(zhuǎn)化P.pastoris酵母菌株.經(jīng)過(guò)G418及MD平板篩選確定陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子后小規(guī)模誘導(dǎo)篩選表達(dá)目的蛋白的轉(zhuǎn)化株.用SDS-PAGE鑒定,得到高表達(dá)目的蛋白轉(zhuǎn)化株后,進(jìn)行大規(guī)模誘導(dǎo),收集大量的目的蛋白H1-EGFc,經(jīng)過(guò)對(duì)蛋白電泳SDS-PAGE膠的激光掃描,高表達(dá)株的蛋白產(chǎn)量約為培養(yǎng)上

2、清的65﹪,約250mg/L.對(duì)收集的蛋白通過(guò)陰離子交換柱進(jìn)行純化后蛋白純度提高至85﹪左右.純化后的蛋白置于4℃RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)性48小時(shí).復(fù)性后的蛋白再進(jìn)行DNA結(jié)合試驗(yàn).該實(shí)驗(yàn)室所構(gòu)建的重組毒素基因PEIIImut為綠膿桿菌毒素第三功能區(qū)突變體,此功能區(qū)C端的5個(gè)氨基酸REDLK突變成KDEL以增加其毒性.將PEIIImut直接組裝入真核表達(dá)載體pcDNA3.1mychisA,形成pcDNA3.1-PEIIImu

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