5，7-二甲氧基白楊素誘導(dǎo)人急性髓性白血病細(xì)胞生長抑制和凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察5,7-二甲氧基白楊素（dMChR）誘導(dǎo)人急性髓性白血病(HL-60)細(xì)胞系細(xì)胞生長抑制和凋亡作用，并探討其作用機(jī)制是否涉及PPARγ活化和PTEN-Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑的調(diào)控。 方法：體外培養(yǎng)HL-60細(xì)胞，MTT比色法測(cè)定dMChR對(duì)HL-60細(xì)胞增殖的影響；細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定HL-60細(xì)胞存活率，繪制生長曲線； AO/EB染色法熒光顯微鏡觀察dMChR誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的凋亡形態(tài)學(xué)改變； PI染色流式細(xì)胞術(shù)(FCM)定

2、量分析dMChR誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡程度；Western blot分析dMChR對(duì)HL-601細(xì)胞PPARγ、 PTEN、p-Akt蛋白表達(dá)和活性的影響。 結(jié)果：MTT比色測(cè)定顯示：dMChR（6.25μM,12.5μM,25.0μM,50.0μM，100.0μM）孵育48小時(shí)，顯著抑制HL-60細(xì)胞細(xì)胞增殖，呈濃度依賴性。其作用效價(jià)強(qiáng)度與化療藥物阿糖胞苷(Ara-C)相當(dāng)，高于先導(dǎo)化合物白楊素(ChR)。細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果表明：1

3、2.5μM，25.0μM和50.0μM 的dMChR均具有抑制HL-60細(xì)胞生長作用，呈濃度依賴性；25μM的dMAhR 可使HL-60細(xì)胞群體倍增時(shí)間延長,由正常的21.5h延長至31.7h。AO/EB染色熒光顯微鏡觀察dMChR處理后，部分HL-60細(xì)胞呈現(xiàn)胞質(zhì)、核呈紅色，核固縮或碎裂的典型凋亡細(xì)胞形態(tài)。PI染色FCM分析發(fā)現(xiàn)12.5μM，25.0μM和50.0μM的dMChR作用48h后，HL-60細(xì)胞凋亡率分別是6.18±2.4

4、％、16.3±3.5％、50.1±5.6％；dMChR (25.0μM)誘導(dǎo)的凋亡率(16.3±3.5％)高于相同濃度的先導(dǎo)化合物白楊素(chrysin, ChR)誘導(dǎo)的凋亡率(4.23±1.1％)。Western blot分析發(fā)現(xiàn)dMChR(25.0μM)分別孵育0h，4h，8h和24h后，HL-60細(xì)胞PPARγ及 PTEN蛋白表達(dá)以時(shí)間依賴方式上調(diào)，而p-Akt蛋白表達(dá)下調(diào)，呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。PPARγ特異性阻斷劑GW9662能有效