乏氧誘導(dǎo)因子1α在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株培美曲塞化療抵抗中的作用.pdf

1、目的：缺氧環(huán)境與化療抵抗的發(fā)生和發(fā)展有密切的關(guān)系，HIF-1 (乏氧誘導(dǎo)因子1)是細(xì)胞在乏氧狀態(tài)下被激活的重要的轉(zhuǎn)錄因子。本實(shí)驗(yàn)旨在研究在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中，乏氧誘導(dǎo)因子-1α在新一代化療藥物培美曲塞二鈉化療抵抗中的作用機(jī)制。
　　 方法：以人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞株為研究對(duì)象，通過模擬常氧和乏氧環(huán)境，MTT 檢測(cè)培美曲塞的藥物敏感性，Westernblot 檢測(cè)siRNA 干擾沉默HIF-1表達(dá)后的蛋白表達(dá)，再利用M

2、TT 檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞對(duì)于培美曲塞的藥物敏感性，并通過轉(zhuǎn)染和流式細(xì)胞儀檢測(cè)乏氧誘導(dǎo)因子-1α在細(xì)胞周期重新分布中的作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.MTT 實(shí)驗(yàn)表明乏氧培養(yǎng)后加入培美曲塞細(xì)胞的抑制率曲線較常氧加藥曲線明顯右移，常氧培美曲塞組和乏氧培美曲塞組組的IC50 有顯著性差異。
　　 2.Westernblot 檢測(cè)表明乏氧條件下HIF-1α蛋白表達(dá)顯著增高，HIF-1α/siRNA 可顯著降低乏氧條件下的HI

3、F-1α蛋白的表達(dá)。
　　 3.利用siRNA 轉(zhuǎn)染后的A549細(xì)胞進(jìn)行MTT 試驗(yàn)，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后培美曲塞在乏氧條件下對(duì)A549細(xì)胞的增殖抑制率明顯增加；乏氧和常氧下藥物對(duì)A549細(xì)胞的抑制率沒有明顯差別。
　　 4.細(xì)胞周期檢測(cè)顯示乏氧環(huán)境可以增加G0/G1 期細(xì)胞阻滯，沉默HIF-1α
　　 可以細(xì)胞G0/G1 期細(xì)胞減少，S 期細(xì)胞增多，siRNA 轉(zhuǎn)染后加入培美曲塞，S 期分布明顯增加。