多聚次黃嘌呤胞嘧啶核苷酸poly(I：C)對(duì)人臍血樹突狀細(xì)胞功能影響的研究.pdf

1、目的：觀察多聚次黃嘌呤胞嘧啶核苷酸(polyriboinosmic polyribocytidylic acid，polyI:C，P)對(duì)人臍血來源樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DC)體外成熟的影響，及探討polyI:C對(duì)人臍血樹突狀細(xì)胞(DC)介導(dǎo)的抗白血病效應(yīng)。 方法：密度梯度離心法分離臍血單個(gè)核細(xì)胞(CB-MNC)，對(duì)照組以RPMI-1640培養(yǎng)液誘導(dǎo)CB-MNC生成DC，實(shí)驗(yàn)各組分別用加有P、重組人粒細(xì)胞-巨

2、噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)+重組人腫瘤壞死因子α(rhTNF-α)+重組人白細(xì)胞介素-4(rhIL-4)(GIT)及GIT+P(GITP)的RPMI-1640培養(yǎng)液誘導(dǎo)CB-MNC生成DC。光鏡下觀察DC形態(tài)，臺(tái)盼藍(lán)拒染法計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞免疫表型，并將細(xì)胞涂片行瑞氏-姬姆薩染色液染色，油鏡下觀察并攝片。從臍血中分離出單個(gè)核細(xì)胞(同前)，對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組均以GIT誘導(dǎo)DC，并于DC培養(yǎng)第4d、第9d加入HL

3、-60細(xì)胞。于培養(yǎng)第7d，實(shí)驗(yàn)組分別加入不同濃度的polyI：C，培養(yǎng)不同的時(shí)間。光鏡下觀察DC形態(tài)，并收獲培養(yǎng)第12天的DC，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC免疫表型后，將DC與急粒緩解期患者外周血淋巴細(xì)胞混合，誘導(dǎo)抗原特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞，MTT法檢測(cè)其殺傷活性。 結(jié)果：①各實(shí)驗(yàn)組均得到一定數(shù)量的典型DC；P組CD1a+、CD83+細(xì)胞比例高于對(duì)照組；GITP組CD83+細(xì)胞比例升高最明顯，高于GIT組。②多聚次黃嘌呤胞嘧啶核苷酸p

4、olyI:C濃度與作用時(shí)間對(duì)CD1a+細(xì)胞比例均無(wú)影響；實(shí)驗(yàn)組的CD83+細(xì)胞比例及殺傷活性均高于對(duì)照組，在一定的范圍內(nèi)，隨著濃度的增大、作用時(shí)間的延長(zhǎng)，CD83+細(xì)胞比例增大，殺傷活性亦增強(qiáng)。 結(jié)論：①多聚次黃嘌呤胞嘧啶核苷酸polyI:C不僅能促進(jìn)臍血DC體外快速成熟，還能協(xié)同rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α促進(jìn)DC體外擴(kuò)增；②多聚次黃嘌呤胞嘧啶核苷酸polyI：C能促進(jìn)DC的快速成熟、擴(kuò)增、增強(qiáng)DC抗原提呈能