雙歧桿菌及其完整肽聚糖對臍血來源樹突狀細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過研究雙歧桿菌和不同劑量雙歧桿菌完整肽聚糖(WholePeptidoglycan，WPG)對臍血單核細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞(Cord bloodmonocyte-derived dendritic cells，CB-MDDCs)形態(tài)、表面標(biāo)志、刺激淋巴細(xì)胞增殖功能及分泌細(xì)胞因子的影響，了解雙歧桿菌及其WPG在體外對CB-MDDCs分化、成熟及免疫調(diào)節(jié)功能的作用；探討雙歧桿菌防治免疫失調(diào)性疾病的可能機(jī)制，為益生菌及其生物活性成分的進(jìn)一

2、步開發(fā)提供依據(jù)。 方法：分離正常孕婦臍血單個核細(xì)胞(Cord blood monocular cell，CBMC)，貼壁培養(yǎng)獲得臍血單核細(xì)胞(Cord blood Monocyte，CB-Mon)，GM-CSF、IL-4聯(lián)合誘導(dǎo)單核細(xì)胞生成未成熟樹突狀細(xì)胞(Dendriticcells，DCs)，實(shí)驗(yàn)組在培養(yǎng)的第7天分別加入兩歧雙歧桿菌全菌、不同劑量(1μg/ml-8μg/ml)兩歧雙歧桿菌WPG，陽性對照組加入脂多糖(Lipo

3、polysaccharide，LPS)，陰性對照組僅加入培養(yǎng)基。通過CB-MDDCs形態(tài)學(xué)觀察，流式細(xì)胞術(shù)檢測CB-MDDCs表面標(biāo)志物CD83及CDla的表達(dá)，MLR檢測CB-MDDCs刺激同種異體T淋巴細(xì)胞能力，ELISA法測定CB-MDDCs培養(yǎng)上清中IL-12、IL-1O的分泌，確定雙歧桿菌及其WPG在體外對CB-MDDCs成熟程度及功能的影響；比較雙歧桿菌與其WPG的免疫調(diào)節(jié)作用的差別。 結(jié)果：(1)CB-Mon在雙歧

4、桿菌或其WPG(1-6μg/ml)與GM-CSF、IL-4協(xié)同誘導(dǎo)作用下，成為形態(tài)上具有典型樹突狀突起的DCs；誘導(dǎo)后的CB-MDDCs刺激同種異體T細(xì)胞的增殖能力及分泌IL-12p70、IL-10的水平顯著高于陰性對照組(P＜0.01)；其中以WPG 5μg/ml組刺激能力最強(qiáng)，且該組細(xì)胞表面標(biāo)志物CD83及CDla的表達(dá)增加。(2)當(dāng)WPG的量達(dá)到2μg/ml時，CB-MDDCs刺激同種異體T淋巴細(xì)胞的能力及分泌IL-12p70、I

5、L-10的水平與雙歧桿菌全菌組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異(P＞0.05)，而當(dāng)WPG的量達(dá)到5μg/ml時，其對CB-MDDCs的刺激能力則明顯高于雙歧桿菌全菌組(P＜0.01)；(3)WPG的濃度在1.5μg/ml時CB-MDDCs分泌的IL-12及IL-10的量呈劑量依賴性，其中WPG 5μg/ml時作用最為顯著，WPG量為6μg/ml時分泌的量減少，WPG量為8μg/ml時，分泌的量與陰性對照組無差異(P＞0.05)。 結(jié)論：