雙歧桿菌完整肽聚糖對哮喘模型小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：以哮喘小鼠為動物模型，通過雙歧桿菌完整肽聚糖（Whole Peptidoglycan，WPG）與正常及哮喘小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞（bone marrow-derived dendritic cell，BMDC）共培養(yǎng)，探討雙歧桿菌WPG對小鼠BMDC的免疫調(diào)節(jié)作用以及WPG作用的時(shí)間-效應(yīng)規(guī)律，揭示以雙歧桿菌為代表的益生菌防治過敏性疾病的可能性機(jī)制。 方法：隨機(jī)將Balb/c小鼠分成正常鼠組和哮喘鼠組，每組8只，模型建立后

2、無菌分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞，GM-CSF和IL-4聯(lián)合誘導(dǎo)七天生成未成熟樹突狀細(xì)胞，將細(xì)胞分為WPG組、陽性對照組、陰性對照組。其中WPG組加入雙歧桿菌WPG5μg/ml，陽性對照組加入脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）1μg/ml、陰性對照組僅加入培養(yǎng)液，24小時(shí)后觀察DC形態(tài)，流式細(xì)胞術(shù)檢測DC表面標(biāo)志物CD11c、CD86及MHc-Ⅱ的表達(dá)，混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（mixed lymphocyte reaction，ML

3、R）檢測DC刺激同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的能力，ELISA法測定DC培養(yǎng)上清中IL-12、IL-10的分泌水平；在正常小鼠WPG組DC加入WPG后0h、12h、24h、36h、48h、60h、72h收集培養(yǎng)上清液，用ELISA法檢測上清中IL-12及IL-10的分泌水平，以觀察WPG作用的時(shí)效性。 結(jié)果： 1.正常與哮喘鼠陰性組DC刺激淋巴細(xì)胞增殖能力、分泌IL-12及IL-10的量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；與正常鼠陽

4、性組比，哮喘鼠陽性組DC表面標(biāo)志CD86表達(dá)高而MHC-Ⅱ表達(dá)低，MLR、分泌IL-12及IL-10的量降低（P<0.05）。在WPG作用下，正常鼠DC表面標(biāo)志CD86、MHc-Ⅱ表達(dá)同陽性組無差別，MLR、分泌IL-12及IL-10的量高于陰性對照組但低于陽性對照組，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；哮喘鼠WPG組DC表面標(biāo)志CD86表達(dá)低于哮喘鼠陽性組，MLR、分泌IL-12、IL-10的量高于哮喘鼠陰性組及陽性組（P<0.05），

5、但低于正常鼠WPG組及陽性組（P<0.05）。 2.雙歧桿菌WPG與正常小鼠BMDC共培養(yǎng)，在不同時(shí)間點(diǎn)測培養(yǎng)上清液中IL-12、IL-10的量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-12、IL-10的量在24小時(shí)內(nèi)隨時(shí)間的延長而增多，24小時(shí)達(dá)高峰，24小時(shí)后呈逐漸下降趨勢。 結(jié)論： 1.本研究通過建立哮喘小鼠動物模型發(fā)現(xiàn)，哮喘小鼠DC存在成熟及功能缺陷。在雙歧桿菌WPG作用下，哮喘鼠DC功能得到一定修復(fù)，促進(jìn)了Th1/Th2平衡；但