耐藥性癲癇患者腦組織和腦脊液中生物標(biāo)記物的篩選及臨床價(jià)值研究.pdf

1、目的：研究神經(jīng)元威斯科特-奧爾德里奇綜合征蛋白（neuronal Wiskott-Aldrich syndrome protein，N-WASP）及上游分子細(xì)胞分裂周期42 GTP結(jié)合蛋白（cell division cycle42 GTP-binding protein，Cdc42），下游分子肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3（actin-related protein2/3，Arp2/3）在耐藥性癲癇患者腦組織中的表達(dá)，探討N-WASP在耐藥性

2、癲癇發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法：基因芯片掃描耐藥性癲癇患者腦組織發(fā)現(xiàn)N-WASP顯著升高后，分別用蛋白印跡、免疫組化及免疫熒光研究40例耐藥性癲癇患者腦組織中N-WASP的表達(dá)，并分別用蛋白印跡、免疫組化及熒光研究其上、下游分子Cdc42、Arp2/3的表達(dá)，并與對(duì)照組進(jìn)行比較。 結(jié)果：基因芯片掃描顯示N-WASP在耐藥性癲癇組中明顯增高（Cy5/Cy3=3.021），蛋白印跡示耐藥性癲癇組腦組織中N-WASP相對(duì)灰度值0

3、.9030±0.0492（x+s），對(duì)照組腦組織為0.4320±0.0727（x±S）（P<0.05）。免疫組化示N-WASP在耐藥性癲癇患者組的OD值為0.384±0.072，比對(duì)照組0.143±0.046明顯升高（P<0.05），免疫熒光與免疫組化結(jié)果一致。Cdc42在耐藥性癲癇和對(duì)照組中的OD值分別為0.032±0.016，0.020±0.005（P<0.05）。Arp2/3免疫印跡檢測(cè)其在耐藥性癲癇組和對(duì)照組中的灰度值分別為0.

4、7765±0.0230，0.4986±0.0823，癲癇組明顯增高（P<0.05）。以上結(jié)果顯示N-WASP、Cdc42和Arp2/3在耐藥性癲癇患者腦組織中表達(dá)顯著上調(diào)。 結(jié)論：N-WASP及其上游Cdc42，下游Arp2/3在耐藥性顳葉癲癇患者腦組織中表達(dá)增高，提示該通路在耐藥性顳葉癲癇的發(fā)生機(jī)制中可能有重要作用。 目的：研究耐藥性顳葉癲癇患者腦脊液中差異蛋白的表達(dá)，通過(guò)與對(duì)照組比較，尋找耐藥性癲癇患者腦脊液中的癲癇

5、生物標(biāo)記物。 方法：運(yùn)用雙向凝膠電泳對(duì)兩組腦脊液進(jìn)行分離，圖像分析后對(duì)差異點(diǎn)行液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜鑒定并進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)查詢。對(duì)鑒定出來(lái)的蛋白質(zhì)通過(guò)免疫印跡進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)果：兩組腦脊液中8個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)有顯著差異表達(dá)（p<0.05），其中維生素D結(jié)合蛋白（vitamin D-binding protein，DBP）在耐藥性癲癇患者中增高，而色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor，PE

6、DF），組織蛋白酶D（cathepsin D，CTSD），gelsolin，載脂蛋白J（apolipoprotein J，apoJ），Ras蛋白特異性鳥(niǎo)嘌呤核苷酸釋放因子1（Ras protein-specific guanine nucleotide-releasing factor1，RASGRF1），F(xiàn)am3c和超氧化物歧化酶1（superoxide dismutase1，SOD1）在耐藥性患者腦脊液中減少。另外6個(gè)蛋白點(diǎn)只在癲癇

7、患者腦脊液膠圖上出現(xiàn)，分別是四連結(jié)素（tetranectin，TN），talin-2，載脂蛋白E（apolipoprotein E，apoE），免疫球蛋白輕鏈lambda（immunoglobulin lambda light chain，IGL@），免疫球蛋白輕鏈kappa可變區(qū)1-5（immunoglobulin kappa variable light chain1-5，IGKV1-5）和膠原C肽鏈內(nèi)切酶增強(qiáng)子1（procolla