PEG修飾人重組粒細胞集落刺激因子的制備工藝及性質(zhì)研究.pdf

1、粒細胞集落刺激因子（G-CSF）是一種譜系特異性生長因子,主要功能為促進嗜中性粒細胞的產(chǎn)生和分化。其作為藥物主要應用于由于接受化療而導致中性粒細胞減少的病人，有效提升病人體內(nèi)的白細胞數(shù)量，增強病人的免疫力。類似于很多蛋白質(zhì)藥物，rhG-CSF體內(nèi)半衰期短，易被酶水解和腎消除，因此實際應用時需要多次注射維持血藥濃度。聚乙二醇化是一種對蛋白質(zhì)藥物進行 PEG共價修飾的技術，通過增加蛋白質(zhì)藥物分子的流體動力學體積，減少了腎清除，從而延長了蛋白

2、質(zhì)藥物的血漿半衰期。本文的研究致力于PEG-rhG-CSF的制備工藝，在保持rhG-CSF活性的同時延長其體內(nèi)半衰期。
　　本文的研究主要包括以下幾個方面：
　　1、rhG-CSF在大腸桿菌中表達多以包涵體形式存在，而外源蛋白形成的包涵體必須經(jīng)過變性、在折疊復性，才能得到有活性的蛋白產(chǎn)物，因此，包涵體的復性成為大規(guī)模制備 rhG-CSF的關鍵技術之一。本研究針對影響包涵體復性的因素，包括pH值、溫度、尿素含量、反應時間等進行

3、考察優(yōu)化。同時，摸索復性液配方中尿素濃度，精氨酸濃度，氧化型/還原型谷胱甘肽比例，甘油所占比例，以提高包涵體的復性效率。
　　2、由于rhG-CSF易被酶水解和腎消除，因此體內(nèi)半衰期短。本研究采用PEG修飾的方法擴大rhG-CSF分子的流體動力學體積，在不影響rhG-CSF活性的同時，增大其體內(nèi)半衰期，并對修飾后分子的活性進行檢測。
　　3、制備的PEG-rhG-CSF由于分子結構和理化特性有些微改變，因此其保存條件與原型相