志賀菌對氟喹諾酮類藥物敏感性降低的相關耐藥基因研究.pdf

1、目的：
　　 研究本地區(qū)志賀菌對氟喹諾酮類抗菌藥物敏感性降低的相關耐藥基因以及志賀菌的耐藥特征、分子流行病學研究。
　　 材料與方法：
　　 收集杭州市第一人民醫(yī)院2008年5月至2010年10月從門診腹瀉患者分離的153株志賀菌，經(jīng)法國生物梅里埃VITEKAMS鑒定儀鑒定和志賀菌血清學鑒定確認。采用瓊脂稀釋法對153株志賀菌進行藥物敏感性檢測，采用PCR法檢測DNA旋轉酶A亞單位(gyrA)、拓撲異構酶ⅣC亞單

2、位(parC)基因的喹諾酮類藥物耐藥決定區(qū)(QRDR)，并對PCR結果進行測序分析，同時用PCR法對質粒介導喹諾酮類耐藥(PMQR)基因qnr和aac(6')-Ib-cr進行篩選。利用脈沖場凝膠電泳技術對菌株間的同源性進行分析，通過接合實驗證明耐藥基因位于質粒上。
　　 結果：
　　 131株宋內志賀菌對萘啶酸的耐藥率達100％，而對諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星全部敏感，對四環(huán)素、復方新諾明和氨芐西林的耐藥率分別為9

3、3.9％、92.8％和93.2％.94％的萘啶酸耐藥宋內志賀菌株對氟喹諾酮類藥物敏感性出現(xiàn)下降。萘啶酸耐藥宋內志賀菌菌株gyrA均發(fā)生單點突變，為83位絲氨酸→亮氨酸(Ser→Leu)突變，但parC未發(fā)生突變；未檢出質粒介導PMQR基因qnr和aac(6')-Ib-cr基因。脈沖場凝膠電泳將131株宋內志賀菌分為4個主要的克隆型。22株福氏志賀菌對萘啶酸的耐藥率達99％，除一株福氏志賀菌對萘啶酸、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星全部敏

4、感外，其余21株福氏志賀菌對氟喹諾酮類藥物敏感性全部出現(xiàn)下降，其中6株福氏志賀菌對環(huán)丙沙星耐藥。萘啶酸耐藥福氏志賀菌同時發(fā)生gyrA的83位絲氨酸→亮氨酸(Ser→Leu)和parC的80位絲氨酸→異亮氨酸(Ser→ILe)突變時，才會造成萘啶酸耐藥福氏志賀菌對氟喹諾酮類藥物敏感性降低；在發(fā)生上述突變的基礎上，gyrA的87位天冬氨酸(Asp)被天冬酰胺(Asn)、甘氨酸(gly)、酪氨酸(Tyr)替代或qnr和aac(6')-Ib-c

5、r基因出現(xiàn)時，萘啶酸耐藥福氏志賀菌才會對氟喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥。各有一株福氏志賀菌分別攜帶qnr和aac(6')-Ib-cr基因，PMQR基因均位于耐藥性質粒上。脈沖場凝膠電泳將22株福氏志賀菌分為2個主要的克隆型。
　　 結論：
　　 萘啶酸耐藥宋內志賀菌對氟喹諾酮類藥物敏感性降低非常普遍，其產(chǎn)生的主要機制為gyrA發(fā)生83位Ser→Leu替換。而萘啶酸耐藥福氏志賀菌已出現(xiàn)對氟喹諾酮類藥物耐藥，其產(chǎn)生的主要機制為gyr