高膽紅素血癥對新生豚鼠聽覺系統(tǒng)功能影響的實驗研究.pdf

1、目的: 探討豚鼠失匹配負波（mismatch negativity，MMN）的反應(yīng)特點，觀察聲刺激頻率和強度對不同年齡豚鼠MMN潛伏期及振幅的影響，建立動物MMN測試方法和客觀評價聽覺辨別能力的檢測指標，為相關(guān)研究提供前期實驗基礎(chǔ)。 建立一種簡單易行的高膽紅素血癥新生豚鼠動物模型，用于開展相關(guān)聽覺系統(tǒng)功能影響方面的研究。通過檢測在高膽紅素血癥狀態(tài)下豚鼠畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射（distortion products otoaco

2、ustic emission，DPOAE）、聽性腦干反應(yīng)（auditory brainstem response，ABR）和MMN的反應(yīng)特點，結(jié)合耳蝸基底膜鋪片、耳蝸石蠟切片等形態(tài)學(xué)觀察，比較不同程度高膽紅素血癥對聽覺系統(tǒng)功能的影響。 方法: 選擇南方醫(yī)科大學(xué)動物中心提供的正常新生和成年豚鼠各10只，腹腔注射麻醉后，將針形電極置于頭部特定部位，聲刺激以“oddball paradigm”模式給予，比較頻率差異和強度差異下

3、兩組豚鼠MMN的檢出率、振幅和潛伏期差異，并且與ABR測試結(jié)果綜合分析，建立動物MMN測試方法和客觀評價聽覺辨別能力的檢測指標。 然后選擇生后5～7天幼年豚鼠30只，隨機分成對照組、低劑量組和高劑量組，給予腹腔注射膽紅素溶液建立高膽紅素血癥動物模型。在造模成功基礎(chǔ)上，根據(jù)給藥前后動物神經(jīng)行為、軀體運動等癥狀，對各組動物行為方面進行評分，同時檢測其DPOAE、ABR及MMN，比較各組間不同檢測結(jié)果的差異。給予4%多聚甲醛行全身心臟

4、灌注固定，斷頭取下耳蝸。左耳行硝酸銀溶液耳蝸灌注染色，耳蝸基底膜鋪片，在光鏡下觀察各組內(nèi)、外毛細胞的損傷情況。將右耳石臘包埋后沿蝸軸行連續(xù)切片，經(jīng)蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色后觀察內(nèi)耳各結(jié)構(gòu)，尤其是螺旋神經(jīng)節(jié)及神經(jīng)纖維。 結(jié)果: 建立一種動物被動模式下MMN測試的實驗方法，經(jīng)使用符合MMN測試和聽覺辨別能力測試要求，并獲得了滿意的測試結(jié)果。頻率和強度差異誘發(fā)MMN成年鼠的潛伏期明顯短于幼鼠

5、，潛伏期差異皆有統(tǒng)計學(xué)意義（前者P=0．002，后者P=0．006），而振幅差異無統(tǒng)計學(xué)意義（前者P=0．498，后者P=0．615）。采用配對t檢驗，兩種刺激方式誘發(fā)的MMN潛伏期、振幅均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0．05）。雙耳間差異同樣無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0．05）。兩組豚鼠ABR除Ⅰ～Ⅲ波間期差異有顯著性（t=2．12，P=0．04），其余各波潛伏期、波間期和閾值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0．05）。 選擇30只幼年豚鼠在建立高膽紅

6、素血癥動物模型后，各組間行為方面評分有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（H=25．707，P=0．000）；同時DPOAE檢測通過率、各頻率幅值均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0．05）； ABR檢測時，低劑量組僅Ⅲ、Ⅴ潛伏期和Ⅰ～Ⅲ波間期明顯延長，較對照組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<0．05），高劑量組各項指標較對照組均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<0．05）；各組間MMN檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（X2=7．438，P=0．024），高劑量組MMN潛伏期明顯較對照組延長，差異有統(tǒng)

7、計學(xué)意義（P<0．05），而MMN振幅差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P>0．05）。通過基底膜鋪片和耳蝸石蠟切片觀察發(fā)現(xiàn)，各組間內(nèi)外毛細胞未見明顯形態(tài)學(xué)改變及缺失，螺旋神經(jīng)節(jié)和神經(jīng)纖維亦未見明顯異常。 結(jié)論: 1．建立動物被動模式下MMN測試的方法，MMN可作為一種較為客觀的判斷聽覺辨別能力和聽覺中樞發(fā)育情況的檢測指標，并為其廣泛應(yīng)用于臨床檢測及動物實驗研究提供前期實驗基礎(chǔ)； 2．豚鼠存在與人相似的MMN波形，并隨年齡有

8、一個發(fā)育、分化和成熟的過程，可作為研究MMN神經(jīng)生理機制的實驗動物。與ABR比較，MMN在檢測聽覺中樞功能的敏感性上更具有優(yōu)勢； 3．高膽紅素血癥能導(dǎo)致聽覺中樞對聲學(xué)信息處理出現(xiàn)異常，對頻率、強度和時間等聲學(xué)特征的辨別功能減退，對聽覺引起的認知功能、學(xué)習(xí)記憶等方面也產(chǎn)生了一定影響； 4．隨著膽紅素含量增高，動物神經(jīng)行為方面出現(xiàn)明顯異常，對聽覺系統(tǒng)功能的損害逐漸加重，導(dǎo)致明顯感音神經(jīng)性聽覺功能障礙； 5．高膽紅素血