白介素-17在糖尿病血管病變中的致病作用及白藜蘆醇保護(hù)性作用的基礎(chǔ)研究.pdf

1、第一部分:2型糖尿病大血管病變患者血清IL-17水平變化及意義
　　目的：探討2型糖尿病(type2 diabetes，T2DM)大血管病變患者血清白細(xì)胞介素-17（Interleukin-17，IL-17）表達(dá)水平及意義，并與相關(guān)的臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析。方法：162例T2DM患者，根據(jù)是否合并大血管病變，分為大血管病變組90例和無血管病變組72例，另選同期健康查體者68例作為正常對照組。采用特異的單克隆抗體放大酶聯(lián)免疫

2、吸附試驗(yàn)(enzymelinked immunosorbent assay, ELISA)法，測定空腹靜脈血中IL-17等炎癥因子水平，統(tǒng)計(jì)IL-17與各指標(biāo)間的關(guān)系，分析其影響因素。同時(shí)根據(jù)部分T2DM患者頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(Intima-media thickness，IMT)，以有無頸動(dòng)脈增厚進(jìn)行分組比較，并進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：T2DM合并大血管病變組血清IL-17、白細(xì)胞介素-23（Interleukin-23，IL

3、-23）、白細(xì)胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）水平顯著高于無血管病變組及正常對照組，T2DM無大血管病變組高于正常對照組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其中T2DM合并頸動(dòng)脈增厚組IL-17、白細(xì)胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）水平明顯高于無頸動(dòng)脈增厚組(P＜0.05)。大血管病變組血清IL-17與體重指數(shù)(Body MassIndex，BMI)、餐后2小時(shí)血糖(2 hour pl

4、asma glucose，2hPG)、超敏C反應(yīng)蛋白（high sensitivity C-Reactive Protein，hs-CRP）、甘油三酯(Triglyceride，TG)、IL-23、IL-6、1L-1β呈正相關(guān)，與高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoproteincholesterol，HDL-C)、白細(xì)胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）呈負(fù)相關(guān)。多元逐步回歸分析顯示IL-17、h

5、s-CRP和HDL-C是T2DM大血管病變的主要影響因素，IL-17與IL-23、TG和HDL-C之間有線性關(guān)系。結(jié)論：T2DM大血管病變組和頸動(dòng)脈增厚組血清IL-17表達(dá)均增高，提示IL-17參與糖尿病大血管病變的炎癥反應(yīng)過程。IL-17可能是T2DM大血管病變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，并可能通過IL-23炎癥信號通路及TG、HDL-C指標(biāo)的變化在糖尿病大血管病變發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用。
　　第二部分:IL-17在糖尿病大血管中的表達(dá)及白藜

6、蘆醇的干預(yù)機(jī)制
　　目的：研究糖尿病大鼠主動(dòng)脈白細(xì)胞介素-17(Interleukin-17，IL-17)的表達(dá)及白藜蘆醇的干預(yù)效應(yīng)，并從表觀遺傳學(xué)角度探討IL-17參與糖尿病大血管病變的潛在機(jī)制和白藜蘆醇的保護(hù)性機(jī)制。方法：將100只SD(Sprague Dawley)大鼠分為4組:對照組(normal group，NC)、正常干預(yù)組(normal interventionalgroup，NB)、糖尿病組(diabetic gr

7、oup，DM)和糖尿病干預(yù)組(diabetic interventionalgroup，DB)，NB和DB組用白藜蘆醇進(jìn)行干預(yù)，通過免疫組化對IL-17表達(dá)進(jìn)行組織學(xué)定位并測量大鼠腹主動(dòng)脈壁厚度，蛋白質(zhì)印跡（Western blotting，WB）、實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(real-time polymerase chain reaction，RT-PCR)及甲基化特異性PCR技術(shù)(Methyl-specific PCR, MSP)，分別比較

8、各組大鼠主動(dòng)脈IL-17蛋白、mRNA的表達(dá)及其基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平的差異。結(jié)果：免疫組化染色顯示IL-17主要表達(dá)于DM組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜，DM組與NC和DB組相比腹主動(dòng)脈壁明顯增厚(P＜0.05);DM組IL-17蛋白及mRNA表達(dá)水平較NC組增高(P＜0.05)，而NB和DB組則分別較NC和DM組下調(diào);同時(shí)DM組IL-17 DNA甲基化水平顯著低于NC組(P＜0.01)，而NB和DB組甲基化水平分別較NC和DM組上調(diào)。結(jié)論：

9、糖尿病大鼠主動(dòng)脈IL-17表達(dá)增強(qiáng)，提示IL-17參與糖尿病大血管病變的炎癥反應(yīng)過程，白藜蘆醇可抑制IL-17的表達(dá)，可能對糖尿病大血管病變有保護(hù)作用，兩者的發(fā)生機(jī)制可能通過調(diào)控IL-17基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平來實(shí)現(xiàn)。
　　第三部分:白藜蘆醇對糖尿病大鼠主動(dòng)脈炎癥因子的表達(dá)和DNA甲基化水平的干預(yù)
　　目的：研究促炎細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（interleu

10、kin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α)、干擾素-γ（interferon-γ，1FN-γ）及抗炎細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-10(interleukin-10，IL-10)在糖尿病大鼠主動(dòng)脈中的表達(dá)，白藜蘆醇對這些細(xì)胞因子的干預(yù)效應(yīng)，并從表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域探索炎癥因子表達(dá)增強(qiáng)或減弱的潛在機(jī)制以及白藜蘆醇的保護(hù)性機(jī)制。方法：將實(shí)驗(yàn)對象SD(Sprague Dawley)大鼠分為4組:對

11、照組（normal group，NC）、正常干預(yù)組(normal interventional group，NB)、糖尿病組(diabetic group，DM)和糖尿病干預(yù)組(diabetic interventional group，DB)，NB和DB組用白藜蘆醇進(jìn)行干預(yù)。經(jīng)過三個(gè)多月造模，分離大鼠主動(dòng)脈，通過免疫組化對IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-10表達(dá)進(jìn)行組織學(xué)定位并測量大鼠腹主動(dòng)脈壁厚度，采用蛋白質(zhì)印跡

12、(Westem blotting，WB)、實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(real-time polymerase chain reaction，RT-PCR)及甲基化特異性PCR技術(shù)（methylation-specific PCR, MSP），分別比較各組大鼠主動(dòng)脈各炎癥因子蛋白、mRNA的表達(dá)及基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平的差異。結(jié)果：免疫組化染色顯示各炎癥因子主要表達(dá)于DM組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜，DM組與NC和DB組相比腹主動(dòng)脈壁明顯增厚(P＜0.

13、05); DM組IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ蛋白及mRNA表達(dá)水平較NC組明顯增高(P＜0.05)，而白藜蘆醇干預(yù)組（NB和DB）組表達(dá)則分別較NC和DM組下調(diào);同時(shí)在DM組IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ基因的特異CpG位點(diǎn)呈現(xiàn)出顯著低于NC組的DNA甲基化水平(P＜0.01)，而NB和DB組甲基化水平分別較NC和DM組上調(diào)。相反的，IL-10在高糖環(huán)境中其基因啟動(dòng)子區(qū)特異CpG位點(diǎn)甲基化程度高，致蛋白及m