低碘膳食對(duì)大鼠腦組織中同源盒基因Nkxs表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、本研究分為三部分： 第一部分：低碘膳食對(duì)大鼠腦組織中同源盒基因Nkxs表達(dá)的影響 為探討甲狀腺功能低下對(duì)大鼠腦組織中同源盒基因Nkxs表達(dá)的影響，本文復(fù)制了胚胎期和生后發(fā)育臨界期碘缺乏致甲低的大鼠模型，取孕16天、新生及20日齡仔鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，(分別相當(dāng)于人胚胎發(fā)育的早、中、晚期)利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)正常及低碘仔鼠腦組織中Nkxs表達(dá)水平。發(fā)現(xiàn)隨著年齡增長(zhǎng)，Nkx-2.1表達(dá)水平迅速下降，各年齡段表達(dá)水平差別有

2、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各年齡組低碘及正常大鼠表達(dá)水平差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，孕16天正常大鼠Nkx-2.1表達(dá)水平明顯高于低碘大鼠，而新生及20日齡低碘大鼠卻明顯高于正常大鼠。正常大鼠,Nkx-2.2在新生期表達(dá)水平最低；低碘大鼠隨年齡增長(zhǎng)表達(dá)水平迅速增高，各年齡組表達(dá)水平差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Nkx-6.1在孕16天表達(dá)水平最高，低碘及正常大鼠表達(dá)水平差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，新生期、20日齡低碘及正常大鼠表達(dá)水平差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各年齡段正常大鼠表達(dá)水平差別有

3、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；低碘大鼠在孕16天與新生、20日齡表達(dá)水平差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而新生與20日齡之間表達(dá)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Nkx-6.2在孕16天及新生期表達(dá)水平都很低，20日齡表達(dá)水平明顯高于前兩組育期；孕16天、20日齡低碘與正常大鼠表達(dá)水平差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，新生期低碘與正常大鼠表達(dá)水平差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果表明：甲狀腺激素與同源盒基因Nkx之間確實(shí)存在相關(guān)關(guān)系，其相關(guān)性在孕16天胎鼠中就已表現(xiàn)出來(lái)，而此時(shí)胎鼠的甲狀腺組織尚未發(fā)育

4、成熟，提示母鼠甲狀腺激素對(duì)胎鼠發(fā)育的重要作用。 第二部分：甲狀腺激素對(duì)原代培養(yǎng)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞Nkxs表達(dá)水平的影響 為了解THs對(duì)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞Nkxs基因表達(dá)的刺激作用，本文利用正常Wistar大鼠腦組織的原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞為研究對(duì)象，加入一定劑量的THs(T<,3>和T<,4>)，在給藥后0、12、24、48和72小時(shí)分別收獲細(xì)胞，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中Nkxs各亞型mRNA水平，動(dòng)態(tài)觀察THs對(duì)Nk

5、xs表達(dá)水平的影響。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)在0h、12h、24h10<'-8>M T<,3>對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞Nkx-2.1表達(dá)量無(wú)明顯刺激作用，48h在T<,3>刺激作用下Nkx-2.1表達(dá)量明顯低于對(duì)照組，72h其表達(dá)量反饋性增高，明顯高于對(duì)照組；在T<,4>刺激作用下，Nkx-2.1表達(dá)量在12h、24h、48h都明顯低于對(duì)照組，72h其表達(dá)量也反饋l生增高。Nkx-2.2在T3刺激12h后，其表達(dá)量明顯低于對(duì)照組，24h后，其表達(dá)量明顯

6、高于對(duì)照組，48h后其表達(dá)量逐漸下降，72h后，其表達(dá)量又反饋性增高，與對(duì)照組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；T<,4>對(duì)于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中Nkx-2.2表達(dá)的刺激作用在0h、12h、24h、72h與T<,3>刺激作用相似，在48h對(duì)Nkx-2.2表達(dá)的下調(diào)作用比T<,3>作用更明顯。Nkx-6.1在12h、24h對(duì)于在T<,3>、T<,4>刺激作用下都有明顯的下調(diào)作用，其表達(dá)量都明顯低于對(duì)照組，48時(shí)在T<,3>、T<,4>刺激作用下，其表達(dá)量都

7、反饋性增高，都明顯高于對(duì)照組，T<,3>的上調(diào)作用要高于T<,4>作用，而72h T<,4>刺激作用明顯增高，其表達(dá)量明顯高于對(duì)照組及T<,3>作用組。Nkx-6.2在T<,3>、T<,4>刺激作用12h后其表達(dá)量高于對(duì)照組，24h、48h后其表達(dá)量逐漸下調(diào)，T<,3>、T<,4>刺激作用72h后，其表達(dá)量都明顯高于對(duì)照組。結(jié)果表明：THs對(duì)于大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中Nkxs各亞型都有不同程度的刺激作用，但這種作用趨勢(shì)不是很明顯，可能與低激素

8、血清作用時(shí)間過(guò)短以及細(xì)胞收獲時(shí)間點(diǎn)的選擇有關(guān)。此外T<,4>不僅僅是一種激素原，其刺激作用有時(shí)也明顯高于T<,3>刺激作用。 第三部分：低碘膳食對(duì)大鼠腦組織細(xì)胞凋亡的影響 為了解正常和碘缺乏大鼠腦組織細(xì)胞凋亡是否存在差異，本文利用已經(jīng)復(fù)制好的低碘及正常大鼠腦組織制作冰凍切片，采用原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Tunnel試劑盒)檢測(cè)新生期低碘及正常大鼠腦組織細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，新生期低碘與正常大鼠腦組織細(xì)胞凋亡差