葉酸靶向載基質(zhì)金屬蛋白酶2反義寡核苷酸磁性納米復合物治療喉癌的實驗研究.pdf

1、中山大學博士學位論文葉酸靶向載基質(zhì)金屬蛋白酶2反義寡核苷酸磁性納米復合物治療喉癌的實驗研究姓名：許熠銘申請學位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：謝民強20100523中山大學博1：學位論文中文摘要制備了葉酸靶向磁性納米藥物，并且在鼻咽癌的治療研究中取得良好效果。本研究擬在此基礎上構建葉酸靶向載MMP2反義寡核苷酸磁性納米復合物，通過體內(nèi)外實驗研究其對喉癌的基因治療效果。本研究包括下述四個部分：第一部分，采用免疫組織化學和免疫熒光方法

2、分別研究葉酸受體在喉癌組織和Hep2細胞株中的表達情況。結果顯示813％(13／16)的喉癌組織標本表達葉酸受體，晚期(IIlIV期)喉癌組織中葉酸受體陽性率高于早期(II期)喉癌，有淋巴結轉移者葉酸受體陽性率高于無淋巴結轉移者，差異均有統(tǒng)計學意義(p90％。這些結果提示以葉酸受體作為靶點的藥物可用于喉癌的治療。第二部分，采用免疫組織化學方法研究基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)和一2(MMP2)在喉癌組織和Hep2細胞株中的表達情況。結果顯

3、示喉癌組織中MMPI和MMP2陽性表達率分別為767％(23／30)和80％(24／30)，其表達程度與喉癌的局部侵襲和淋巴轉移具有密切關系。這些結果為我們進行喉癌的MMP2基因治療提供了分子生物學基礎。第三部分，將醛基化海藻酸鈉改性的葉酸靶向磁性納米載體與MMP2反義寡核苷酸耦聯(lián)，成功制備了載MMP2反義寡核苷酸的葉酸靶向磁性納米復合物。采用普魯士藍鐵染色、MRI成像技術和透射電鏡等檢測這種磁性納米復合物對喉癌細胞的體內(nèi)和體外靶向性能

4、。結果顯示該納米藥物對喉癌Hep一2細胞和裸鼠皮下移植瘤有良好的靶向性。第四部分，通過體內(nèi)、外實驗研究了葉酸靶向載MMP一2反義寡核苷酸的磁性納米復合物對喉癌的基因治療效果。體外實驗中，RTPCR、Westernblot、Matrigel體外侵襲實驗顯示，該納米復合物能夠顯著減少Hep2細胞中MMP2的表達，并抑制Hep一2細胞的侵襲能力。MTT法顯示其對Hep2細胞的增殖能力沒有影響。體內(nèi)實驗顯示葉酸靶向載MMP2反義寡核苷酸磁性納米