椒目油防治哮喘氣道重建機(jī)制的研究.pdf

1、目的與意義: 哮喘氣道重建（remodeling）又稱氣道重塑或重構(gòu)，是支氣管哮喘（哮喘）一大重要病理特征。氣道重建主要表現(xiàn)為氣道平滑肌增生、基底膜增厚、腺體增生及上皮下纖維增殖、膠原沉積等，從而造成氣道管壁增厚、管腔狹窄。氣道重建可導(dǎo)致氣流不可逆阻塞和持續(xù)性氣道高反應(yīng)性，并能成為頑固性哮喘反復(fù)發(fā)作的病理學(xué)基礎(chǔ)，研究它有利于哮喘的早期防治和阻止哮喘病情的進(jìn)一步惡化。目前評(píng)價(jià)任何一個(gè)防治哮喘的藥物不僅要看它的平喘作用，而且還要看它

2、能否具有防治氣道重建的作用。 中藥椒目治療支氣管哮喘歷史悠久，療效顯著，目前國(guó)內(nèi)許多單位相繼開展了椒目治療哮喘研究，取得豐碩成果，國(guó)內(nèi)大量的文獻(xiàn)報(bào)道以及我們自己的研究成果，無論從分子生物學(xué)的角度或是從臨床的角度都說明了椒目能有效治療哮喘。但是椒目能否有效地防止哮喘氣道重建（氣道重塑或重構(gòu)），目前還未見到文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究選擇與氣道重建密切相關(guān)的幾種因素通過復(fù)制大鼠哮喘氣道重建模型，初步揭示椒目防治哮喘氣道重建的機(jī)制，為更好的應(yīng)

3、用椒目防治哮喘提供理論依據(jù)。研究?jī)?nèi)容： 1．探討椒目油對(duì)哮喘大鼠氣道重建模型Ⅲ型、V 型膠原的影響。 2．探討椒目油對(duì)哮喘大鼠氣道重建模型中TGF-β1 表達(dá)的影響。 3．探討椒目油對(duì)哮喘大鼠氣道重建模型氣道平滑肌PCNA 表達(dá)的影響。 材料與方法： 健康SD大鼠30 只，體重200-250g，將30 只SD大鼠隨機(jī)分為3 組：哮喘組(10 只)，椒目油治療組(10 只)，正常對(duì)照組(10 只)。

4、參考文獻(xiàn)[3]用l％ OVA和1％氫氧化鋁溶液0.5 ml大鼠腹腔注射，第8 d重復(fù)注射1 次，至15d開始吸入1％ OVA溶液激發(fā)5 min。L％ OVA溶液需要每天配制，霧化時(shí)將大鼠置于特制塑料容器內(nèi)霧化吸人。治療組在霧化激發(fā)前1h給予椒目油和熟精油的混合物(按1：1 混合)，以3mL/kg灌胃，對(duì)照組以生理鹽水代替OVA致敏和霧化。3 組大鼠在激發(fā)3 個(gè)月后處死，經(jīng)右主支氣管注入10％中性甲醛溶液至肺適度膨脹，將右肺連同右主支氣管

5、剪下放入10％中性甲醛固定一周。從右側(cè)下肺葉開口處以水平位取材，制成石蠟切片，行HE染色作病理觀察。以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為空白對(duì)照，用ABC法，組織切片按序以PB漂洗，30％羊血清，一抗、二抗孵育后浸入ABC液中1 h，取出經(jīng)PBS、Tris-HC1緩沖液漂洗，再以DAB顯色，蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水，透明、封蓋。每例標(biāo)本取2 張切片，每張切片隨機(jī)選取小支氣管5 支，應(yīng)用計(jì)算機(jī)灰度分析測(cè)定粘膜下層吸光度確定Ⅲ型、V型膠原以及T

6、GF-β1 的含量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用?x±s表示，應(yīng)用SPSS 11.0 軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)分析，p<0.05 為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1. 肺組織HE 染色哮喘氣道重建組大鼠肺組織切片HE 染色可見支氣管上皮細(xì)胞腫脹、脫落，管壁增厚，管腔變窄，管壁內(nèi)及管周有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以EOS 和淋巴細(xì)胞為主；椒目油治療組大鼠的肺組織可見支氣管上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)較哮喘組為輕，支氣管壁及管腔內(nèi)的炎癥細(xì)胞也大為減少；對(duì)照組大鼠的肺組織則

7、無上述改變。而且可觀察到哮喘組大鼠氣道壁厚度較對(duì)照組明顯增加，椒目油治療組大鼠氣道壁厚度較哮喘氣道重建組明顯降低。 2. 鏡下觀察免疫組化切片的變化Ⅲ型、V 型膠原染色呈棕黃色，Ⅲ型膠原主要在氣道壁粘膜下層表達(dá)，V 型膠原表達(dá)主要位于基底膜上；測(cè)定Ⅲ型、V 型膠原陽性表達(dá)的計(jì)算機(jī)灰度分析：哮喘氣道重建組明顯高于對(duì)照組；椒目油治療組低于哮喘氣道重建組(P 均<0.05)而略高于對(duì)照組( p<0.05)。 TGF-β1 主要

8、表達(dá)在氣道粘膜上皮層，經(jīng)ABC 染色成棕黃色。灰度分析結(jié)果顯示：哮喘氣道重建組明顯高于對(duì)照組；椒目油治療組低于哮喘氣道重建組(P 均<0.05) 略高于對(duì)照組( p<0.05)。 PCNA 免疫組化染色呈棕黑色圓形顆粒，位于上皮下基底膜、平滑肌細(xì)胞及外周成纖維細(xì)胞。哮喘氣道重建組陽性表達(dá)明顯高于對(duì)照組；椒目油治療組明顯低于哮喘氣道重建組；略高于對(duì)照組。 結(jié)論： 1、椒目油可以降低哮喘大鼠氣道重建氣道壁炎癥反應(yīng)及氣