桑樹內(nèi)生真菌的分離鑒定及產(chǎn)油菌Macrophomina phaseolina MOD-1的研究.pdf

1、目前,國內(nèi)外學(xué)者已對多種經(jīng)濟(jì)林木和藥用植物內(nèi)生真菌及其次生代謝產(chǎn)物等多方面內(nèi)容進(jìn)行過研究,發(fā)現(xiàn)植物內(nèi)生真菌普遍存在于各種植物中,在植物體內(nèi)能產(chǎn)生多種具有生物活性的次生代謝產(chǎn)物,具有抗腫瘤、殺菌、殺蟲、調(diào)節(jié)植物生長及增強(qiáng)植物抗性等不同作用。而關(guān)于桑樹中有無內(nèi)生真菌及其次生代謝產(chǎn)物研究還未見報道。有鑒于此,本文從四個桑樹品種中分離內(nèi)生真菌并進(jìn)行了相關(guān)研究。主要結(jié)果如下： 1.用組織分離法結(jié)合表面消毒有效性評價,從四個桑樹品種中共分離

2、出內(nèi)生真菌114株。經(jīng)顯微形態(tài)觀察,初步歸屬為鐮孢霉屬Fusarium、鏈格孢屬Alternaria、柱霉屬Scytalidium等21個屬,表明桑樹內(nèi)生真菌具有豐富的生物多樣性。研究發(fā)現(xiàn)不同桑樹品種之間內(nèi)生真菌的分布有一定的差異,同一桑樹品種不同器官內(nèi)生真菌的種類和數(shù)量差異較大,根中最多,莖中次之,葉中最少。鐮孢霉屬為根中優(yōu)勢種群,鏈格孢屬為莖、葉中的優(yōu)勢種群,叢梗孢屬M(fèi)onilia和鐮孢霉屬菌株在根、莖、葉中均能分離到,其它屬的菌株

3、只存在于其中的某一個或兩個器官組織。 2.運(yùn)用顯微形態(tài)觀察和蘇丹Ⅲ染色法從桑樹內(nèi)生真菌中篩選出一株產(chǎn)油菌株。用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法鑒定并命名為桑樹內(nèi)生菜豆殼球孢菌MOD-1(Mulberry endophyte Macrophomina phaseolina MOD-1)。菌株的5.8S rDNA/ITS區(qū)段序列已在GeneBank中注冊,登錄號為EU250575。經(jīng)測定菌體含油量達(dá)22.72％,且對纖維素有一定的降解能力。

4、 3.用酸熱法提取油脂,油脂甲酯化后采用氣.質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行了MOD-1菌株油脂脂肪酸組成的定性分析和相對含量測定。結(jié)果表明:MOD-1菌株油脂包含18種脂肪酸,其中不飽和脂肪酸含量為69.88％,主要為反油酸(37.80％)、亞油酸(13.55％)、棕櫚油酸(10.71％)、油酸(6.72％),還有少量的十四碳烯酸、二十碳二烯酸、二十碳四烯酸等不飽和脂肪酸；飽和脂肪酸含量為30.12％,主要為棕櫚酸(19.56％)、硬脂酸(8.22

5、％)、花生酸(1.11％)、肉豆蔻酸(0.51％)以及少量的月桂酸、十五烷酸、十七烷酸、山崳酸等飽和脂肪酸。 4.運(yùn)用光學(xué)顯微鏡、透射電鏡技術(shù)觀察了MOD-1菌株不同發(fā)育階段的油脂形成、積累的過程,并對此菌株油脂的形成機(jī)制進(jìn)行了探討。結(jié)果表明:MOD-1油脂的產(chǎn)生和積累跟菌絲的生長和菌核的分化幾乎同步進(jìn)行：每個細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)首先產(chǎn)生大量的嗜鋨顆粒、蛋白-脂類復(fù)合體；伴隨MOD-1菌體細(xì)胞的生長發(fā)育,細(xì)胞內(nèi)嗜鋨顆粒和蛋白-脂類復(fù)合體