口服減毒鼠傷寒沙門菌介導(dǎo)ePNP-MePdR自殺基因系統(tǒng)對(duì)荷瘤鼠協(xié)同抗腫瘤作用的研究.pdf

1、隨著細(xì)菌學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展,拓寬了細(xì)菌介導(dǎo)腫瘤治療的思路,減毒沙門氏菌載體系統(tǒng)作為治療惡性腫瘤的呈遞工具逐步得到人們的認(rèn)可。沙門氏菌是兼性厭氧菌,在好氧和厭氧環(huán)境都能生長(zhǎng),所以可在腫瘤的厭氧環(huán)境繁殖。為了使沙門氏菌成為安全的基因傳遞系統(tǒng),通過(guò)突變代謝過(guò)程的基因來(lái)限制其致病性,降低毒性,使它可在生長(zhǎng)旺盛的腫瘤中積聚。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),減毒沙門氏菌培養(yǎng)方便且可將含外源基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)至哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi),促進(jìn)了減毒沙門氏菌載體系統(tǒng)的應(yīng)用。
　

2、　 ePNP/MePdR自殺基因系統(tǒng)作為一種基因?qū)蛐悦盖八幹委煼?gene-directed enzyme prodrug therapy,GDEPT)正受到越來(lái)越多的關(guān)注。6-甲基嘌呤-2'-脫氧核苷(6-methylpurine-2'-deoxyriboside,MePdR)本身是無(wú)毒的藥物前體,可被大腸桿菌(Escherichia coli)的嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,e

3、PNP)分解成有毒的6-甲基嘌呤(6-methylpurine,MeP)。MeP會(huì)抑制DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成,高效殺傷腫瘤細(xì)胞;哺乳動(dòng)物來(lái)源的PNP則不能分解MePdR。由于ePNP/MePdR自殺基因系統(tǒng)有強(qiáng)大的旁觀者效應(yīng),可以殺傷非增殖期的腫瘤細(xì)胞,它被認(rèn)為是治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤等人類惡性實(shí)體瘤的最佳選擇之一。
　　 利用減毒鼠傷寒沙門氏菌介導(dǎo)ePNP/MePdR自殺系統(tǒng),國(guó)際

4、上還沒有人嘗試過(guò)。本研究采用減毒鼠傷寒沙門氏菌SC36(hisGaro A purI cys),它是由本實(shí)驗(yàn)室對(duì)SL3261進(jìn)行二次DES誘變篩選而得的,屬嘌呤和氨基酸雙重缺陷株,毒性較SL3261更低。重組菌株攜帶的外源基因包括大腸桿菌嘌呤核苷磷酸化酶基因(ePNP)、鼠源的白介素-12(mIL-12)和胞嘧啶脫氨酶(CD),口服治療常見的鼠源實(shí)體瘤(Lewis肺癌和B16F10黑色素瘤)。我們首先構(gòu)建了CMV通用啟動(dòng)子調(diào)控下的ePN

5、P基因表達(dá)載體pEGFP-C1-PNP。為了研究減毒沙門氏菌介導(dǎo)的pEGFP-C1-PNP在體內(nèi)外表達(dá)情況,將pEGFP-C1-PNP,白介素-12(mIL-12)、胞嘧啶脫氨酶(CD)分別轉(zhuǎn)化至減毒沙門氏菌SC36中。我們利用MTT,凋亡試驗(yàn)等試驗(yàn),評(píng)估沙門氏菌介導(dǎo)的ePNP/MePdR單自殺基因系統(tǒng)、ePNP/MePdR和CD/5-FC雙自殺基因系統(tǒng),細(xì)胞因子mIL-12和ePNP/MePdR聯(lián)合系統(tǒng)在體外殺傷腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)。體內(nèi)實(shí)