竹葉特征性黃酮類化合物研究——單體制備、抗氧活性及其血管保護(hù)作用研究.pdf

1、本文以竹葉中特征性黃酮類化合物為研究對象，對四個竹葉碳苷黃酮的大鼠體內(nèi)代謝行為進(jìn)行了探索，得到了其吸收形式、吸收部位、代謝方式以及時相變化的信息，為竹葉抗氧化物(AOB)的人體安全性評價提供參數(shù)和依據(jù)。采用HPLC制備等技術(shù)，從AOB中分離制備兩類特征性的黃酮單體，即四個碳苷黃酮(葒草苷、異葒草苷、牡荊苷、異牡荊苷)和一個多甲氧基黃酮(苜蓿素)。然后，以異葒草苷和苜蓿素為代表，選取木犀草苷、木犀草素和芹菜素為對照，采用Rancimat法

2、、DPPH法、FRAP法以及化學(xué)發(fā)光法等六種抗氧化性能評價方法，探討黃酮糖苷元與糖苷、碳苷與氧苷、甲基化和非甲基化的結(jié)構(gòu)特征與其抗氧化和抗自由基活性之間的量效和構(gòu)效關(guān)系。最后，采用兔離體主動脈環(huán)灌流模型，從高鉀和苯腎上腺素(PE)預(yù)收縮兩條途徑研究竹葉黃酮對PDC和ROC的抑制作用，對KCl濃度—效應(yīng)曲線及PE引起細(xì)胞內(nèi)鈣釋放和外鈣內(nèi)流所引發(fā)血管收縮作用的影響，對高鉀和鳥苷酸環(huán)化酶抑制劑亞甲基藍(lán)預(yù)處理后的作用，對環(huán)氧合酶抑制劑吲哚美辛預(yù)

3、處理后的作用，以及對一氧化氮合酶抑制劑L—NAME預(yù)處理后的作用；并用硝苯地平作為陽性對照藥，研究竹葉黃酮的協(xié)同增效作用以及在細(xì)胞外有無鈣離子存在的情況下對血管舒張因子NO釋放量的影響，觀察其對離體兔胸主動脈環(huán)的舒張血管效應(yīng)，探討可能的作用機(jī)制。主要研究結(jié)果歸納如下：
　　 (1)采用大鼠灌胃AOB的體內(nèi)代謝模型，通過對主要臟器及消化道排泄物中目標(biāo)化合物的分析檢測，探討碳苷黃酮的吸收形式、吸收部位、排泄方式以及隨時相的變化，初步

4、探明四種竹葉碳苷黃酮不經(jīng)血尿途徑吸收和代謝，而是經(jīng)胃腸道途徑進(jìn)行代謝，與文獻(xiàn)報道的氧苷黃酮的常規(guī)代謝方式存在明顯差異。
　　 (2)以5升AOB濃縮液(固形物含量≥20％)為原料，通過柱層析(AB—8大孔吸附樹脂)法得到6.5g富含碳苷黃酮的餾分和174g富含苜蓿素的餾分，然后采用制備型HPLC法分別從上述餾分中分離四種碳苷黃酮和苜蓿素，并用溶析結(jié)晶法和膜透析法純化，分別得到葒草苷49mg、異葒草苷142mg、牡荊苷15mg、異

5、牡荊苷62mg和苜蓿素3.09g，純度均大于90％。
　　 (3)Rancimat法測得在添加量為0.02—0.05％時，五種黃酮試樣抗山茶油氧化的性能依次為：木犀草素＞苜蓿素＞木犀草苷＞芹菜素＞異葒草苷；DPPH法測得其清除DPPH'的IC50為0.089—105.328 mmol/L，活性強(qiáng)弱順序為：木犀草素≈異葒草苷＞木犀草苷＞＞苜蓿素＞＞芹菜素；FRAP法測得當(dāng)添加量為0.02—0.1mmol/L時，五種試樣的鐵還原能力

6、為：異葒草苷＞木犀草素≈木犀草苷＞苜蓿素＞芹菜素；化學(xué)發(fā)光法研究表明，其清除O'2—的能力為苜蓿素＞木犀草苷＞異葒草苷＞木犀草素＞＞芹菜素，IC50值范圍為0.05—10.59mmol/L；清'OH能力為木犀草素＞木犀草苷＞苜蓿素＞異葒草苷＞＞芹菜素，IC50值為0.24—691.03mmol/L；清H2O2能力為苜蓿素＞木犀草苷＞木犀草素＞異葒草苷＞＞芹菜素，IC50值為0.37—130.58 mmol/L。
　　 (4)采用

7、兔離體主動脈環(huán)灌流模型，觀察竹葉黃酮(總黃酮含量≥50％)對血管環(huán)的直接作用，發(fā)現(xiàn)竹葉黃酮對PE和高鉀引起的預(yù)收縮血管環(huán)具有舒張作用，并呈濃度依賴關(guān)系。提示竹葉黃酮可能抑制了高鉀和PE引起的外鈣內(nèi)流或者是抑制了細(xì)胞內(nèi)兩種不同鈣池的鈣釋放，從而降低了細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度而產(chǎn)生血管舒張作用。且此作用表現(xiàn)為非內(nèi)皮依賴，表明竹葉黃酮是直接作用于血管平滑肌細(xì)胞而產(chǎn)生作用。對比人體臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株在胞外有無鈣離子時NO的釋放量，說明胞外鈣離子只是增

8、強(qiáng)了其產(chǎn)生NO的能力。加入一氧化氮合酶(NOS)抑制劑L—NAME和鳥苷酸環(huán)化酶(sGC)抑制劑亞甲基藍(lán)后，竹葉黃酮的擴(kuò)血管作用明顯減弱，揭示其舒張血管的作用是通過NO介導(dǎo)途徑，因此推論NO—sGC—cGMP途徑可能介導(dǎo)了竹葉黃酮的舒張血管作用。竹葉黃酮還顯示出與硝苯地平(陽性對照藥物)的協(xié)同增效作用，用環(huán)氧合酶抑制劑吲哚美辛(10μmol/L)預(yù)處理，當(dāng)竹葉黃酮試樣濃度大于3000μg/mL時、對PE預(yù)處理的離體血管環(huán)具有顯著的舒張效