單側輸尿管梗阻大鼠腎間質血小板反應蛋白1的表達及氯沙坦對其影響.pdf

1、目的：腎間質纖維化是各種慢性腎損害的共同特征，是腎臟疾病進展至終末期的共同途徑。大量研究表明，腎間質纖維化進展與轉化生長因子B 1(TGF-β 1)表達及活化增加相關。血小板反應蛋白1(Thrombospondin-1，TSP-1)作為體內關鍵的轉化生長因子β1(TGF-β 1)活化因子，通過激活潛在的TGF-β 1促進腎小球硬化及腎間質纖維化，在腎臟疾病中的作用越來越受到關注。體外系膜細胞研究發(fā)現(xiàn)，血管緊張素II(Angiotensi

2、n II，AngII)誘導的TGF-β1的活化也是通過TsP-1介導的，AngII 1型受體阻滯劑可以抑制AngII誘導的 TSPl的分泌。本試驗選用氯沙坦對實驗性腎間質纖維化模型進行干預，觀察腎臟病理改變及檢測TSP-1、TGF-β 1、ColIII的表達，探討TSP-1高表達與腎間質纖維化關系，及氯沙坦對腎間質纖維化大鼠腎臟的保護作用及其可能機制方法：選擇清潔級健康雄性SD大鼠45只，體重(200±10)克，隨機分為三組：假手術組(

3、A組)，輸尿管結扎組(UUO組即B組)，氯沙坦治療組(C組)，每組各15只。將各組大鼠以水合氯醛(0.1ml/kg)腹腔注射麻醉后，行左側恥骨上切口，沿左腎下極尋找到左側輸尿管，在中上1/3處用4號線上下結扎兩處，然后從中剪斷輸尿管，以防逆行性感染，假手術組除不結扎和剪斷輸尿管外，其他手術過程同前。術后各組大鼠均正常飲食。治療組大鼠以氯沙坦50mg/kg/d制成2ml混懸液灌胃，1次/日；假手術組和UUO組大鼠用生理鹽水2ml/d灌胃，

4、1次/日；三組均于術前一天開始灌胃至術后第3天、第7天和第14天，分三批留取標本。輸尿管結扎術后分別于第3、7、14天處死，迅速取出左腎，按冠狀位縱形切開，取腎組織的1/2置于10％福爾馬林固定液固定，酒精逐級脫水，二甲苯透明石蠟包埋，制成5um切片。光鏡HE、Masson染色觀察腎臟病理變化。采用免疫組織化學染色測定腎間質TSP-1、TGF-β 1、ColIII的表達，結果應用圖像分析系統(tǒng)進行半定量分析。實驗結果均以均數(shù)±標準差(-x

5、±s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，應用SPSS10.0統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。結果：1.病理改變：光鏡下觀察，HE及Masson染色A組未見明顯異常，腎小管上皮細胞排列整齊，細胞結構完整，小管與小管之間間隙緊密，小管間質無炎性細胞浸潤，小管基底膜光滑、連續(xù)。HE染色B組術后3天腎小管擴張不明顯，間質中少量單核細胞與淋巴細胞浸潤；B組7天可見腎小管明顯擴張，腎小管上皮細胞空泡變性、水腫、甚

6、至壞死，腎間質大量炎單核及淋巴細胞浸潤，間質寬度增加；B組14天可見彌漫的腎小管基底膜增厚皺縮，小管基底膜不同程度斷裂，皮質及外髓萎縮的腎小管較多，間質中大量淋巴及單核細胞浸潤，可見大量纖維增生。C組各時間點改變均較同期B組改變明顯減輕。Masson染色可見B組術后3天開始出現(xiàn)腎小管擴張，腎間質寬度增加，間質浸潤細胞增多，膠原成分增加，此后，病變逐漸加重。C組與B組平行相比腎小管間質病變程度明顯減輕，腎問質相對面積明顯減少(P＜0.05

7、)。三組間比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。2.免疫組織化學結果顯示：TSP-1在腎小管間質的表達：A組腎小管間質TSP-1極少量表達，B組3天、7天、14天TSP-1的表達進行性增加，主要表達在腎小管上皮細胞，C組TSP-1較同期B組表達下降。組間、組內均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。TGF-β 1在腎小管間質的表達：在A組各時期僅腎小球、腎小管間質微量表達，B組各時相點TGF-β 1蛋白的表達隨時間呈進行性升高，且隨著梗阻時間延長

8、升高程度更加明顯，至第14天表達最強。C組較同期B組表達下降。組間、組內均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)℃ol Ⅲ在腎小管間質的表達：Col Ⅲ在A組僅微量表達于腎小動脈周圍，腎間質有極少量表達。B組Col Ⅲ在腎間質中呈棕黃色條索狀分布，隨梗阻時間時間延長表達量增加。C組與B組平行相比，Col Ⅲ表達量降低(P＜0.05)。進一步對各組TsP-1的表達與TGF-β 1、ColⅢ的表達進行相關性分析，結果顯示，TSP-1與TGF-β 1、