人尿激酶用于雄性小鼠免疫避孕的有效性研究.pdf

1、第一部分人尿激酶用于雄性小鼠免疫避孕的免疫方法和效價分析 目的：建立利用人源尿激酶（uPA）分子作為抗原誘導(dǎo)雄性昆明小鼠產(chǎn)生抗人uPA多克隆抗體的實驗方法，檢測所用免疫方法的有效性及穩(wěn)定性。 方法：將成年雄性昆明小鼠隨機分為5組：空白對照組（不施予任何處理）、佐劑對照組（100μl生理鹽水+等量佐劑乳化后皮下多點注射）；uPA低劑量免疫組（20μg/100μl uPA溶液100μl+等量佐劑乳化后皮下多點注射）、uPA中

2、劑量免疫組（40μg/100μl uPA溶液100μl+等量佐劑乳化后皮下多點注射）、uPA高劑量免疫組（80μg/100μl uPA溶液100μl+等量佐劑乳化后皮下多點注射）。每2周免疫1次，于第3次免疫后1周取其尾動脈血清以酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測各組抗體效價，設(shè)PBS對照便于比較背景溶液OD450值。以上方法在不同批次雄鼠中重復(fù)3次。 結(jié)果：以ELISA法測出血清OD450值間接反映血清中抗體相對含量。uPA低

3、、中、高劑量免疫組與空白、佐劑對照組相比較，抗人uPA多克隆抗體相對含量增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；隨著uPA免疫劑量的增加，誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體相對含量有下降趨勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；uPA低、中、高劑量免疫組血清中抗人uPA多克隆抗體效價均達到1：10240以上。 結(jié)論：建立了利用人源uPA分子作為抗原誘導(dǎo)雄性小鼠產(chǎn)生抗人uPA多克隆抗體的實驗方法，使用該法免疫3次即可在雄性小鼠體內(nèi)產(chǎn)生穩(wěn)定的抗體效價。

4、 第二部分人尿激酶免疫雄性小鼠對其生殖能力的影響 實驗一：人尿激酶免疫雄性小鼠對其交配能力和生育能力的影響 目的：通過人源uPA分子免疫后雄性小鼠的交配實驗，檢測免疫后雄鼠交配能力和生育能力的改變。 方法：動物分組和處理參照第一部分。于免疫3次后分別將各組雄鼠與處于發(fā)情期或發(fā)情前期的成年雌鼠進行合籠，次日查陰栓或鏡下檢查陰道細胞灌洗涂片，計算各組雄鼠的交配成功率；于交配成功后第14天將雌鼠解剖，觀察各組雄

5、鼠致雌鼠妊娠率并計算孕鼠的平均活胎數(shù)。 結(jié)果：各組雄鼠的交配成功率無明顯差異（P＞0.05）；uPA低、中、高劑量免疫組雄鼠的致雌鼠妊娠率以及平均活胎數(shù)與對照組相比顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001），空白和佐劑對照組之間未見明顯差異（P＞0.005）。 結(jié)論: 采用人尿激酶免疫雄性小鼠后雄鼠交配能力無明顯改變但是生育能力顯著下降。 實驗二：人尿激酶免疫雄性小鼠對其精子功能的影響 目的：對人源uP

6、A分子免疫后雄性小鼠的附睪尾精子進行各項檢測，評價免疫對雄性小鼠精子功能的影響。 方法：動物分組和處理參照第一部分。以人源uPA免疫雄性小鼠3次后，檢測其性腺器官指數(shù)和精子功能（活動率、存活率、低滲腫脹率、精子密度、爬高試驗、uPA誘導(dǎo)產(chǎn)生趨化運動精子數(shù)、體外受精率等）各項指標(biāo)的改變。 結(jié)果：①性腺臟器指數(shù)：各組雄鼠性腺臟器指數(shù)無顯著性差異（P＞0.05）；②精子存活率：uPA低、中、高劑量免疫組雄鼠附睪尾精子存活率比對

7、照組明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；③精子活動率：uPA低、中、高劑量免疫組雄鼠附睪尾精子活動率比對照組顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；④精子低滲腫脹率：uPA低劑量免疫組雄鼠附睪尾精子低滲腫脹率比對照組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而uPA中、高劑量免疫組附睪尾精子低滲腫脹率與對照組相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；⑤精子密度：uPA低、中、高劑量免疫組雄鼠附睪尾精子密度比對照組明顯降低，差

8、異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；⑥精子爬高試驗：各組雄鼠附睪尾精子爬高試驗中爬高距離相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；⑦uPA誘導(dǎo)產(chǎn)生趨化運動精子數(shù)：uPA中、高劑量免疫組雄鼠附睪尾精子經(jīng)uPA誘導(dǎo)產(chǎn)生趨化運動精子數(shù)明顯減少（P＜0.05），而低劑量免疫組沒有明顯改變（P＞0.05）；⑧體外受精率：uPA低、中、高劑量免疫組雄鼠附睪尾精子體外受精率比對照組明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），免疫劑量的高低對體外受精率沒有明