母體能量水平對(duì)梅山和約克夏胎豬及生后卵巢發(fā)育的影響.pdf

1、卵巢發(fā)育與母豬的繁殖年限密切相關(guān)，適當(dāng)?shù)娘暭Z能量水平調(diào)控卵泡健康發(fā)育是保證母豬適時(shí)發(fā)情、受胎、并提高產(chǎn)仔數(shù)的基礎(chǔ)。原始卵泡作為卵巢發(fā)育的起點(diǎn)，在胎兒期已形成。為弄清胎兒期具有時(shí)間依賴性的功能蛋白對(duì)卵巢發(fā)育的作用及母體能量水平對(duì)胎豬卵巢發(fā)育的影響，本研究比較了梅山豬和約克夏豬胎兒卵巢發(fā)育以及其對(duì)母體飼糧能量水平敏感性的差異，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究了母體能量水平對(duì)后代（生前、生后）卵巢健康發(fā)育的影響，本研究包括以下三部分:
　　試驗(yàn)一

2、 梅山和約克夏胎豬卵巢發(fā)育的差異研究
　　本試驗(yàn)旨在比較梅山豬和約克夏豬胎兒卵巢發(fā)育過程中調(diào)控原始卵泡形成和轉(zhuǎn)化為次級(jí)卵泡時(shí)的關(guān)鍵蛋白表達(dá)。試驗(yàn)分別選取日齡、體重相近的純種梅山（72.58±0.73kg）和約克夏（135.73±0.54kg）初產(chǎn)母豬各8頭，分別用同一頭純種梅山和約克夏公豬精液人工授精，配種后分別參照中國(guó)豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(2004)和NRC(2012)配制梅山和約克夏母豬妊娠期飼糧。妊娠0-30天，每頭母豬每天飼喂2kg

3、;31-90天，每天飼喂2.4kg。妊娠第55天每個(gè)品種隨機(jī)選擇4頭母豬深度麻醉后屠宰，剩余母豬于妊娠第90天屠宰，收集雌性胎豬卵巢，利用雙向熒光差異凝膠電泳結(jié)合質(zhì)譜分析的方法考察兩個(gè)品種卵巢蛋白表達(dá)差異。結(jié)果顯示:
　　1.電泳結(jié)果:1）妊娠第55天，兩個(gè)品種胎兒卵巢有1551個(gè)差異蛋白點(diǎn)，約克夏較梅山胎豬卵巢共計(jì)14個(gè)蛋白上調(diào)，13個(gè)蛋白下調(diào)（約克夏/梅山＞1.6，梅山/約克夏＞1.6，P＜0.05蛋白點(diǎn)27個(gè)）。2）妊娠第9

4、0天，兩個(gè)品種胎兒卵巢中存在1400個(gè)差異蛋白點(diǎn)，約克夏較梅山胎豬卵巢共計(jì)7個(gè)蛋白上調(diào)，9個(gè)蛋白下調(diào)（約克夏/梅山＞1.6，梅山/約克夏＞1.6，P＜0.05蛋白點(diǎn)16個(gè)）。
　　2.質(zhì)譜分析結(jié)果:1）妊娠第55天，約克夏胎豬卵巢表達(dá)上調(diào)蛋白主要參與原始卵泡組裝，如肌動(dòng)蛋白、抗胰蛋白酶、波形蛋白;梅山胎豬卵巢表達(dá)上調(diào)蛋白為原始卵泡形成前的相關(guān)蛋白，如絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1β、絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1α

5、等。2）妊娠第90天，約克夏胎豬卵巢表達(dá)上調(diào)的蛋白主要參與應(yīng)激反應(yīng)，如熱休克蛋白;梅山胎豬卵巢表達(dá)上調(diào)蛋白為調(diào)節(jié)原始卵泡向初級(jí)卵泡轉(zhuǎn)化相關(guān)的蛋白，如甲胎蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。
　　以上結(jié)果表明:梅山和約克夏胎豬卵巢發(fā)育過程中，梅山豬卵巢原始卵泡形成時(shí)間較晚，但是梅山胎豬于原始卵泡向初級(jí)卵泡轉(zhuǎn)化階段卵巢發(fā)育潛能優(yōu)于約克夏豬。
　　試驗(yàn)二 母體能量水平對(duì)不同品種胎豬卵巢發(fā)育的影響
　　本試驗(yàn)旨在考察母體能量水平對(duì)約克夏豬和梅山

6、豬胎兒卵巢發(fā)育的影響。試驗(yàn)選取日齡、體重相近的純種約克夏（135.54±0.66kg）和梅山（72.84±0.66kg）初產(chǎn)母豬各16頭，分別用同一頭純種約克夏和梅山公豬精液人工授精，配種后約克夏母豬分別飼喂能量水平為3.4Mcal/kg、3.0Mcal/kg飼糧;梅山母豬飼喂能量水平為3.0Mcal/kg、2.6Mcal/kg飼糧，飼喂量及飼喂方式同試驗(yàn)一。妊娠第55，90天時(shí)，每組隨機(jī)選擇4頭母豬深度麻醉后屠宰，收集雌性胎豬卵巢，首

7、先通過蛋白組學(xué)技術(shù)，測(cè)定約克夏3.0Mcal/kg組以及梅山2.6Mcal/kg組卵巢樣品，進(jìn)而分析同一品種不同時(shí)間點(diǎn)卵巢發(fā)育差異蛋白，明確不同時(shí)間點(diǎn)特征性蛋白表達(dá)規(guī)律，并進(jìn)一步考察能量水平對(duì)特征蛋白mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果顯示:
　　1.蛋白組學(xué)分析結(jié)果:1）約克夏豬妊娠第55天與妊娠第90天相比胎兒卵巢有1551個(gè)差異蛋白點(diǎn)，其中25個(gè)蛋白上調(diào)，18個(gè)蛋白下調(diào)(55d/90d＞1.6，90d/55d＞1.6，P＜0.05的蛋白

8、點(diǎn)43個(gè));質(zhì)譜分析結(jié)果顯示妊娠55天約克夏胎豬卵巢上調(diào)的蛋白主要有甲胎蛋白、抗胰蛋白酶、波形蛋白等，妊娠90天高表達(dá)的主要為凝溶膠蛋白、78葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白等。2）梅山豬妊娠第55天與妊娠第90天相比胎兒卵巢有1740個(gè)差異蛋白點(diǎn)，其中15個(gè)蛋白上調(diào)，12個(gè)蛋白下調(diào)（55d/90d＞1.6，90d/55d＞1.6，P＜0.05的蛋白點(diǎn)27個(gè)）;質(zhì)譜分析結(jié)果顯示妊娠55天梅山胎豬卵巢顯著上調(diào)的蛋白主要包括甲胎蛋白、肽脯氨酰順反異構(gòu)酶等;妊

9、娠90天胎豬顯著上調(diào)的蛋白主要為抗胰蛋白酶、凝溶膠蛋白等。2.基因表達(dá)
　　結(jié)果:1)與低能量水平組相比，約克夏豬妊娠期母體飼喂高能量水平飼糧，顯著降低了妊娠55天胎兒卵巢中調(diào)控原始卵泡形成的關(guān)鍵蛋白抗胰蛋白酶、甲胎蛋白mRNA的表達(dá)量(P＜0.05)，同時(shí)也降低了妊娠90天胎兒卵巢中調(diào)控細(xì)胞抗應(yīng)激能力的關(guān)鍵蛋白78葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白以及調(diào)控原始卵泡向初級(jí)卵泡轉(zhuǎn)化的重要蛋白凝溶膠蛋白mRNA的表達(dá)量（P＜0.05）。2）妊娠55天，母

10、體飼喂不同能量水平飼糧對(duì)梅山胎豬卵巢原始卵泡形成的關(guān)鍵蛋白如抗胰蛋白酶、甲胎蛋白等的表達(dá)量無顯著影響，而且妊娠90天母體飼喂不同能量水平飼糧對(duì)梅山胎豬卵巢中調(diào)控原始卵泡向初級(jí)卵泡轉(zhuǎn)化的凝溶膠蛋白以及參與機(jī)體炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵蛋白肽脯氨酰順反異構(gòu)酶的表達(dá)量也無顯著影響。
　　本試驗(yàn)結(jié)果表明:母體高能量水平通過影響調(diào)控原始卵泡形成、原始卵泡向初級(jí)卵泡轉(zhuǎn)化以及細(xì)胞抗應(yīng)激能力等基因的表達(dá)，不利于約克夏胎豬卵巢發(fā)育;母體攝入不同能量水平飼糧不影

11、響梅山豬胎兒卵巢發(fā)育。
　　試驗(yàn)三 母體妊娠期飼糧能量水平對(duì)后代卵巢健康的影響
　　本試驗(yàn)旨在考察母體能量水平對(duì)約克夏豬后代卵巢發(fā)育過程中氧化應(yīng)激、卵泡發(fā)育的影響。24頭約克夏妊娠母豬高、低能量水平飼喂，前期處理（妊娠0-90天）與試驗(yàn)二相同，妊娠第90天屠宰后，各處理組余下4頭母豬飼喂至分娩，每天飼喂3kg。泌乳期均采食相同飼糧，仔豬斷奶后每窩選擇6頭雌性仔豬，按豬場(chǎng)后備母豬常規(guī)飼養(yǎng)管理方式飼養(yǎng)。母豬妊娠第55天、90天每

12、組隨機(jī)選擇4頭母豬屠宰并分別收集胎兒卵巢，子代母豬160天和初情時(shí)，每窩均選擇平均體重的1頭母豬屠宰并分別收集子代母豬卵巢樣品，測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示:
　　1.母體妊娠期高能量水平降低子代160天時(shí)大卵泡數(shù)目、肝臟重量以及初情階段小卵泡數(shù)目(P＜0.05)。2.與妊娠期低能量水平組相比，母體高能量水平提高了妊娠90天胎豬卵巢丙二醛含量（P＜0.05），降低了總超氧化物歧化酶(P＜0.01)、CuZn-超氧化物歧化酶(P＜0.05

13、)、谷胱甘肽還原酶(P=0.05)、谷胱甘肽過氧化物酶(P＜0.05)以及總抗氧化能力(P＜0.05)的酶活;妊娠期母體高能量水平降低子代后備母豬160天階段時(shí)卵巢中總超氧化物歧化酶活力（P＜0.05）、谷胱甘肽過氧化物酶(P＜0.05)以及總抗氧化能力(P＜0.05)。3.母體妊娠期高能量水平導(dǎo)致妊娠90天胎豬卵巢中B細(xì)胞淋巴瘤因子2(B-celllymphoma-2，BCL2)等促凋亡相關(guān)因子mRNA相對(duì)表達(dá)量高于低能組(P＜0.0

14、5)，程序性死亡調(diào)節(jié)因子(Bcl-2 Assaciated X protein，BAX)等凋亡抑制因子低于低能組(P＜0.05)。后備母豬160天時(shí)BAX的mRNA相對(duì)表達(dá)量低能組高于高能組(P＜0.05)，同時(shí)，BCL2的mRNA相對(duì)表達(dá)量在160天和初情時(shí)低能組均低于高能組（P＜0.05）。
　　本試驗(yàn)結(jié)果表明:妊娠期母體攝入高能量水平飼糧加劇了子代卵巢氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡，降低卵泡數(shù)目，不利于后代卵巢健康。
　　綜上所述