一氧化氮在P物質(zhì)誘導(dǎo)BALB-c小鼠搔抓反應(yīng)中的作用.pdf

1、[目的]
　　 1.通過皮內(nèi)注射P物質(zhì)(SP)建立BALB/c小鼠急性瘙癢模型。
　　 2.觀察Spantide(NK1受體拮抗劑)、L-精氨酸(L-arg，NO供體)、L-NAME(總NOS抑制劑)、氨基胍(iNOS抑制劑)對SP誘導(dǎo)小鼠搔抓反應(yīng)的影響，探討一氧化氮(NO)在SP誘導(dǎo)的BALB/c小鼠搔抓反應(yīng)中的作用。
　　 [方法]
　　 1.BALB/c小鼠急性瘙癢模型的建立：對照組、實驗組分別在頸

2、背部皮下、皮內(nèi)注射生理鹽水和不同劑量SP(20、40、80、160 nmol/site)50μl，注射后在無人條件下拍攝小鼠搔抓行為1 h，回放錄像計數(shù)小鼠后爪對注射部位的搔抓次數(shù)。
　　 2.同時注射Spantide、L-arg或NOS抑制劑對SP誘導(dǎo)小鼠搔抓反應(yīng)的影響：頸背部同時皮內(nèi)注射SP(80 nmol/site)和生理鹽水、Spantide(0.5 nmol/site)、L-arg(300 nmol/site)、L-N

3、AME(100 nmol/site)、氨基胍(50 mg/kg)，注射總體積均為50μl。
　　 3.提前注射Spantide、L-arg或NOS抑制劑對SP誘導(dǎo)小鼠搔抓反應(yīng)的影響：頸背部皮內(nèi)注射生理鹽水(模型組)、Spantide(0.5 nmol/site，Spantide組)、L-arg(300 nmol/site，L-arg1組)、L-NAME(100 nmol/site，L-NAME組)、氨基胍(50 nmol/sit

4、e，氨基胍組)，10 min后皮內(nèi)注射SP(80 nmol/site)；L-arg2組在頸背部皮內(nèi)注射L-arg(300 nmol/site)后5 min，皮內(nèi)注射SP(80 nmol/site)。第二次注射時旁開0.5cm，注射總體積均為40μl。
　　 4.注射部位皮膚中皮膚中NO含量及iNOS表達(dá)測定：頸背部皮內(nèi)注射Spantide(0.5 nmol/site)、L-arg(300 nmol/site)、L-NAME(10

5、0 nmol/site)、氨基胍(50 nmol/site)，10 min后皮內(nèi)注射SP(80 nmol/site)。注射SP后5 min處死小鼠，剪下注射處皮膚，分別用硝酸還原酶法檢測組織中NO含量、S-P法行免疫組織化學(xué)染色，染色結(jié)果用圖像分析軟件進(jìn)行處理。
　　 [結(jié)果]
　　 1.皮下注射生理鹽水和不同劑量SP引起的小鼠搔抓次數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。除生理鹽水和20 nmol/site SP組之外，皮

6、內(nèi)注射40～160 nmol/site SP可使小鼠出現(xiàn)劑量依賴性搔抓反應(yīng)(P<0.01-0.05)；這種搔抓反應(yīng)在注射SP后5～10 min達(dá)到高峰，30～40 min后基本消退。
　　 2.同時皮內(nèi)注射Spantide、L-NAME對SP誘導(dǎo)的搔抓反應(yīng)無明顯影響(P>0.05)，而提前10 min注射Spantide、L-NAME可明顯減少小鼠搔抓次數(shù)(P<0.01)；同時或提前10 min、5 min注射L-arg對SP誘

7、導(dǎo)的小鼠搔抓均無明顯影響(P>0.05)；同時注射大劑量氨基胍(10 mg/kg)可增強(qiáng)SP誘導(dǎo)的小鼠搔抓反應(yīng)(P<0.01)，而提前10 min注射小劑量氨基胍(50 nmol/site)可明顯減少小鼠搔抓次數(shù)(P<0.05)。
　　 3.Spantide組、L-NAME組、氨基胍組小鼠皮膚中iNOS表達(dá)和NO含量明顯低于SP組(P<0.01-0.05)，但其在L-arg組中無明顯升高(P>0.05)。
　　 [結(jié)論]

8、
　　 1.皮內(nèi)注射40～160 nmol/site SP可使BALB/c小鼠出現(xiàn)劑量依賴性搔抓反應(yīng)，而皮下注射SP不能引起明顯的搔抓反應(yīng)。
　　 2.SP可通過激活皮膚中NK1受體來上調(diào)iNOS表達(dá)和促進(jìn)NO合成，從而引起小鼠搔抓。
　　 3.L-arg對SP誘導(dǎo)的BALB/c小鼠搔抓反應(yīng)無明顯影響。
　　 4.NOS抑制劑(L-NAME、氨基胍)可通過下調(diào)iNOS表達(dá)來減少皮膚中NO含量，從而抑制SP