川芎嗪玻璃化液保存同種異體周圍神經(jīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分川芎嗪玻璃化液對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞凋亡及其相關(guān)基因的影響。 目的：探討不同濃度的川芎嗪玻璃化保存液對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)中雪旺細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因的影響。 方法：選擇成年清潔級(jí)SD雄性大鼠24只，在骨盆口以遠(yuǎn)5mm處切斷雙側(cè)坐骨神經(jīng)，向遠(yuǎn)端游離約15mm切斷，共獲得48條神經(jīng)，按玻璃化保存液中川芎嗪的濃度隨機(jī)分為1個(gè)對(duì)照組（不含川芎嗪-A組）及3個(gè)實(shí)驗(yàn)組（100mg/L-B組，200mg/L-C組，400mg/L-D組）

2、，-196℃液氮保存，3周后分別進(jìn)行HE染色光鏡檢測(cè)、Bcl-2、Bax免疫組化檢測(cè)、細(xì)胞凋亡TUNEL檢測(cè)。 結(jié)果：C、D組坐骨神經(jīng)中雪旺細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯少于A、B組，C、D組坐骨神經(jīng)的Bcl-2陽性表達(dá)率均明顯高于A、B組，Bax陽性表達(dá)率均明顯低于A、B組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；C、D組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 第二部分川芎嗪玻璃化液對(duì)大鼠異體坐骨神經(jīng)免疫反應(yīng)的影響。 目的：探討不同濃度的川芎嗪玻璃化

3、保存液對(duì)異體神經(jīng)免疫反應(yīng)的影響。 方法：選擇成年清潔級(jí)SD雄性大鼠24只，切取雙側(cè)坐骨神經(jīng)，共獲得48條神經(jīng)，按玻璃化保存液中川芎嗪的濃度隨機(jī)分為A、B、C、D4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，-196℃液氮保存3周后，選擇成年清潔級(jí)Wistar雄性大鼠48只隨機(jī)分為相應(yīng)的4組作為受體，在其背部皮下植入經(jīng)過含川芎嗪的玻璃化液保存的SD大鼠的坐骨神經(jīng)；另外選擇成年清潔級(jí)Wistar雄性大鼠12只作為對(duì)照組，植入新鮮自體神經(jīng)。術(shù)后2周進(jìn)行大體觀察、組織學(xué)

4、和免疫學(xué)檢測(cè)。 結(jié)果：C、D組CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞的侵潤(rùn)程度明顯輕于A、B組，神經(jīng)組織較好保持原形態(tài)，周圍僅見極少量淋巴細(xì)胞侵潤(rùn)，與E組無明顯差別。 第三部分川芎嗪濃度對(duì)大鼠異體坐骨神經(jīng)玻璃化保存后再生的影響。 目的：探討不同濃度的川芎嗪對(duì)玻璃化保存的大鼠異體坐骨神經(jīng)再生的影響。 方法：選擇成年清潔級(jí)SD雄性大鼠48只作為供體，切取雙側(cè)坐骨神經(jīng)，制成15mm神經(jīng)段，按玻璃化保存液中川芎嗪的濃度隨機(jī)分

5、為A、B、C、D4個(gè)組，-196℃液氮保存3周。3周后選擇成年清潔級(jí)Wistar雄性大鼠96只作為受體，做成坐骨神經(jīng)缺損10mm的模型，并隨機(jī)分為4組。神經(jīng)段復(fù)溫后移植給相應(yīng)組的受體。術(shù)后分別于4周、8周和16周進(jìn)行大體觀察以及移植神經(jīng)的光鏡、電鏡、電生理、軸突圖像分析等檢查。 結(jié)果：4組中以C、D組再生效果最好，B組其次，A組最差。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，神經(jīng)電生理結(jié)果、軸突圖像分析以及運(yùn)動(dòng)終板計(jì)數(shù)差異顯著（P<0.01）。 第

6、四部分-20℃川芎嗪玻璃化液保存大鼠異體神經(jīng)對(duì)再生的影響。 目的：探討不同時(shí)間段-20℃川芎嗪玻璃化液保存大鼠異體坐骨神經(jīng)對(duì)再生的影響。 方法：-20℃川芎嗪玻璃化液（川芎嗪濃度為200mg/L）（A組）保存成年SD雄性大鼠坐骨神經(jīng)，時(shí)間分別為1周、2周，然后選擇成年Wistar雄性大鼠坐骨神經(jīng)缺損模型作為受體，神經(jīng)段復(fù)溫后移植給受體，術(shù)后分別于4周、8周、16周進(jìn)行大體觀察以及移植神經(jīng)的大體、光鏡、電鏡、電生理、熒光逆

7、行示蹤、運(yùn)動(dòng)終板等檢查；并分別與-20℃玻璃化液（不含川芎嗪）（B組）和-196℃川芎嗪玻璃化液（川芎嗪濃度為200mg/L）（C組）保存的坐骨神經(jīng)進(jìn)行比較。 結(jié)果：保存1周時(shí)-20℃川芎嗪玻璃化液組與-196℃川芎嗪玻璃化液組再生效果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與20℃玻璃化液組的差異有顯著性（P<0.01）；保存2周以后3組中以-196℃川芎嗪玻璃化液組再生效果最好，-20℃川芎嗪玻璃化液組其次，-20℃玻璃化液組最差。