普伐他汀對(duì)新生大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原基因表達(dá)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討普伐他汀(Prav)對(duì)幼年大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖及膠原基因表達(dá)的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。 方法： 1.細(xì)胞分離培養(yǎng)和鑒定：用酶消化法分離細(xì)胞，差速貼壁分離法獲得心肌成纖維細(xì)胞為材料，光鏡和免疫組化的方法鑒定細(xì)胞。 2.細(xì)胞增殖檢測(cè)：MTT比色法測(cè)定細(xì)胞增殖，RT-PCR方法測(cè)定Ⅰ、Ⅲ型膠原前體序列的含量。 3.實(shí)驗(yàn)分組：根據(jù)不同的藥物及藥物不同濃度，實(shí)驗(yàn)共分兩大部分，第一部分：觀察Prav

2、對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的影響，主要分四個(gè)步驟：首先觀察Prav對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下的心肌成纖維細(xì)胞增殖是否有影響，設(shè)不同濃度的Prav(10-6～10-4M)組和空白對(duì)照組。第二步觀察Prav對(duì)血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)刺激下心肌成纖維細(xì)胞增殖的影響，設(shè)AngⅡ組和不同濃度的Prav(10-6～10-4M)+Ang Ⅱ組。第三步：觀察Prav抑制AngⅡ刺激心肌成纖維細(xì)胞增殖的作用通路，分別用膽固醇代謝途徑的中間產(chǎn)物甲羥戊酸(MVA)、焦磷酸二牛龍牛兒

3、基酯(GGPP)、焦磷酸法尼酯(FPP)進(jìn)行干預(yù)研究，分為Prav+AngⅡ+MVA組；Prav+AngⅡ+GGPP組；Prav+AngⅡ+FPP組。第四步，觀察氧化應(yīng)激是否參與Ang Ⅱ?qū)Τ衫w維細(xì)胞的增殖作用，以及探討Prav抑制作用是否與抑制氧化應(yīng)激有關(guān)，分為5組：空白組，AngⅡ組，過(guò)氧化氫酶組，AngⅡ+過(guò)氧化氫酶組，AngⅡ+Prav組，AngⅡ+過(guò)氧化氫酶+Prav組。第二部分，實(shí)驗(yàn)分組同前，觀察Prav對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下，Ang

4、 Ⅱ刺激下Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達(dá)的影響，以及MVA、GGPP、FPP對(duì)Prav作用的干預(yù)后和氧化應(yīng)激對(duì)Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1.培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)過(guò)光鏡和免疫組化的方法鑒定證實(shí)為心肌成纖維細(xì)胞。 2.Prav對(duì)心肌成纖維細(xì)胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達(dá)的影響： ①Prav對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下的成纖維細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響，Pray各濃度組(10-6～10-4M)與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

5、 ②Prav呈濃度依賴性地抑制Ang Ⅱ的促增殖作用。Prav各濃度組A值明顯低于Ang Ⅱ組(P<0.01)。 ③Prav在基礎(chǔ)狀態(tài)下能抑制Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達(dá)，Pray各濃度組(10-6～10-4M)Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA水平均低于空白對(duì)照組(P<0.01)。 ④Prav呈濃度依賴性地抑制Ang Ⅱ刺激下的Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達(dá)。Prav各濃度組(10-6～10-4M)Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA水平減少，與AngⅡ組比

6、較有顯著性差異(P<0.01)。 ⑤MVA，GGPP可完全阻斷Prav的抑制作用，與AngⅡ組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與Prav(10-4M)+AngⅡ組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。FPP對(duì)Prav的作用無(wú)影響，與Prav(10-4M)+AngⅡ組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 ⑥過(guò)氧化氫酶能抑制AngⅡ刺激的CF增殖和Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達(dá)，與AngⅡ組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，抑制作用不

7、及Prav，與Prav組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，過(guò)氧化氫酶與Prav合用與單用Prav組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.Prav呈濃度依賴性地抑制AngⅡ介導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞增殖。 2.Prav呈濃度依賴性地抑制基礎(chǔ)狀態(tài)及Ang Ⅱ介導(dǎo)的CF膠原合成。 3.抑制甲羥戊酸途徑可能是Prav發(fā)揮抑制Ang Ⅱ刺激的CF增殖和膠原合成的作用機(jī)制。 4.氧化應(yīng)激參與了Ang Ⅱ刺激的CF增殖和膠原合成的作用