尾加壓素II受體介導同型半胱氨酸刺激血管外膜成纖維細胞增殖及遷移作用.pdf

1、背景及目的：高同型半胱氨酸血癥（hyperhomocysteinemia，HHcy）作為一種新的心血管危險因素，與血管重塑(Vascular remodeling)這一病理生理過程的發(fā)生發(fā)展有著密切的關系。血管重塑的過程受到多種因素的影響，尾加壓素II（Urotensin II，UII）作為一種縮血管活性肽，參與了血管重塑的發(fā)生和發(fā)展。本課題組前期在HHcy合并主動脈球囊損傷大鼠模型上，發(fā)現(xiàn)HHcy促進損傷血管內膜增生同時，新生內膜組織

2、上UII及其受體GPR14（Urotensin II receptor，UT）的蛋白及基因表達水平增加。然而，同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)和UII及其受體之間的直接作用尚未闡明。為此，本課題在離體培養(yǎng)的大鼠胸主動脈外膜成纖維細胞(adventitial fibroblasts，AFs)上，研究了Hcy對UII及其受體GPR14表達的調控作用，并探討了UII及其受體是否介導了Hcy刺激AFs增殖及遷移作用。
　　

3、方法：大鼠主動脈血管外膜成纖維細胞體外培養(yǎng)采用組織貼塊法，實驗使用3到5代細胞，無血清RPMI-1640培養(yǎng)基同步化培養(yǎng)24小時，然后按下述方案進行：
　　（1）在AFs培養(yǎng)液中分別以濃度（0~300μmol/L）和時間（0~48h）梯度方式加入外源性Hcy刺激，采用蛋白免疫印跡試驗法（Western blot）測定細胞GPR14表達的變化；制作細胞爬片，采用免疫細胞化學法測定細胞內UII的表達變化；
　?。?）在培養(yǎng)液中預

4、先加入UII受體阻斷劑Urantide(10-6mol/L)，干預UII受體，再加入Hcy刺激48h，分別采用BrdU摻入法檢測細胞增殖，Transwell法檢測細胞遷移能力。
　　結果：
　　1. Hcy可促進AFs表達UII受體GPR14。不同濃度UII刺激細胞后，30μmol/L、100μmol/L和300μmol/L Hcy刺激組細胞GPR14蛋白表達分別較對照組增加150.30％（P>0.05）、200.24%（P

5、>0.05）和265.96%（P<0.05）。Hcy（濃度300μmol/L）分別刺激細胞12h、24h和48h后，GPR14蛋白表達較對照組分別增加22.39%（P>0.05）、121.97%（P>0.05）和168.05%（P<0.05），表明Hcy以濃度及時間依賴性方式促進細胞GPR14表達。
　　2. Hcy可明顯促進AFs表達U II。采用免疫細胞化學法檢測表明，對照組可見少量UII表達，而在Hcy處理組表達呈強陽性，明

6、顯高于對照組（P<0.001）。
　　3. Hcy促進AFs增殖及遷移的作用能夠被UII受體拮抗劑Urantide所抑制。Hcy刺激組細胞增殖及遷移水平較對照組分別增高45.91%（p<0.01）和79.06%（p<0.01），而Hcy+Urantide組細胞的增殖及遷移水平較Hcy刺激組降低58.67%（p<0.001）和30.54%（p<0.01）。
　　結論：同型半胱氨酸可促進大鼠主動脈外膜成纖維細胞U II及其受體G