stim1和orai1蛋白在哮喘大鼠支氣管平滑肌中的表達.pdf

1、目的:支氣管哮喘是一種由氣道上皮細胞、肥大細胞、嗜酸性粒細胞、T淋巴細胞、嗜中性粒細胞及多種細胞組分參與的慢性氣道炎癥反應(yīng),此種氣道慢性炎癥為非特異性變應(yīng)性炎癥,以嗜酸性粒細胞浸潤為主。以氣道炎癥為發(fā)生基礎(chǔ),氣道黏膜水腫,分泌物增加,氣道上皮損傷,支氣管收縮,氣道反應(yīng)性增加,平滑肌細胞增生,細胞外基質(zhì)增加,氣道可逆性下降,導(dǎo)致氣道重塑的發(fā)生,氣道重塑是慢性氣道炎癥發(fā)展的必然結(jié)果,氣道平滑肌細胞是哮喘發(fā)病、氣道重塑的主要效應(yīng)細胞。研究發(fā)現(xiàn)

2、鈣庫調(diào)控鈣離子內(nèi)流(SOCE)在機體生理、病理活動中起著重要作用,參與調(diào)節(jié)鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及細胞的生長、遷移、增殖與分化,鈣離子釋放激活鈣離子通道蛋白(orai1)和基質(zhì)交感分子1(stim1)是構(gòu)成SOCE的重要分子,與哮喘氣道平滑肌細胞增殖存在密不可分的關(guān)系,本實驗將通過免疫組化實驗觀察stim1和orai1蛋白在哮喘氣道平滑肌細胞中表達水平的變化,以期證實構(gòu)成SOCE的orai1和stim1與支氣管哮喘的發(fā)生、發(fā)展存在的聯(lián)系。
　

3、　方法:按照隨機分組的原則,將40只清潔級雄性SD大鼠分成2組,分別為哮喘組和對照組,每組20只,(1)哮喘組:于第1、8、15天分別予以無菌腹腔注射10％ OVA溶液1 ml(含100 mg OVA和100 mg氫氧化鋁)進行致敏,于第16天起置于霧化罐中霧化吸入含有1%OVA的生理鹽水1 ml,進行激發(fā),每次30 min,共7 d,使其出現(xiàn)打噴嚏、喘息、呼吸急促或呼吸困難等表現(xiàn)。(2)對照組:用生理鹽水代替腹腔注射及霧化吸入,吸入時

4、間相同。最后一次霧化吸入后24 h內(nèi),用3%戊巴比妥(0.3 ml/100 g)腹腔注射進行麻醉后行開胸手術(shù),收集肺組織及肺泡灌洗液(BALF),離心BALF后將沉淀細胞用改良牛氏血細胞計數(shù)板做細胞計數(shù)。將浸入4%甲醛溶液固定的新鮮肺組織,24 h后制作蠟塊,后切片制作成肺標(biāo)本切片。肺組織病理切片 HE染色判斷哮喘模型是否建立成功,分析 BALF中的細胞總數(shù)及分類計數(shù),應(yīng)用免疫組化技術(shù)及彩色病理圖文分析系統(tǒng)測定表達stim1和orai1

5、蛋白陽性細胞平均光密度值。通過統(tǒng)計學(xué)方法對各組指標(biāo)數(shù)據(jù)進行分析比較。
　　結(jié)果:肺組織病理切片HE染色鏡下觀察呈現(xiàn)大量炎性細胞(肥大細胞、肺泡巨噬細胞、嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞等)浸潤,支氣管黏膜腫脹,杯狀細胞增殖,肌層肥厚,氣道上皮細胞下纖維化,支氣管腔內(nèi)可見黏液栓等,證實哮喘模型建立成功。哮喘組中大鼠BALF中細胞總數(shù)、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞計數(shù)明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,分別是(110.70±27.56 v

6、s50.00±19.77,P<0.05)、(28.80±5.07 vs5.5±2.64,P<0.05)、(7.8±2.25 vs1.6±1.08,P<0.05)。哮喘組大鼠支氣管平滑肌表達 orai1蛋白陽性細胞平均光密度值明顯高于對照組(0.099±0.025 vs0.072±0.014,P<0.05)。哮喘組和對照組大鼠支氣管平滑肌表達stim1蛋白陽性細胞的平均光密度值無明顯差異(0.093±0.025 vs0.088±0.017