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1、以體外培養(yǎng)1月齡伊莎蛋雛雞脾臟淋巴細(xì)胞為研究對(duì)象,在培養(yǎng)液中添加不同濃度的三氯化鋁(AlCl3),對(duì)照組添加相同體積的培養(yǎng)液,應(yīng)用MTT比色法、放免法、半定量RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)等方法觀測(cè)鋁對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞活性、細(xì)胞增殖、免疫細(xì)胞因子、抗氧化功能、鈣穩(wěn)態(tài)及細(xì)胞凋亡等的影響,旨在探討鋁對(duì)雞免疫細(xì)胞毒作用及其機(jī)制,為鋁毒危害的解除提供理論依據(jù)。研究結(jié)果表明: 1.應(yīng)用臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)和MTT比色法測(cè)得染鋁24h后雞脾臟淋巴細(xì)胞的半
2、數(shù)抑制濃度(IC50)為0.832±0.01mg/ml。 2.經(jīng)MTT比色法測(cè)得低劑量鋁能明顯抑制T細(xì)胞增殖,對(duì)B細(xì)胞增殖不起作用,高劑量鋁對(duì)T、B細(xì)胞增殖均起抑制作用。 3.鋁可增加淋巴細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)的漏出率,導(dǎo)致細(xì)胞活性下降,說(shuō)明鋁可改變淋巴細(xì)胞膜通透性。 4.染鋁組脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中白介素-2(IL-2)和腫瘤壞死因子(TNF-α)含量低于對(duì)照組,組間差異顯著或極顯著(p<0.01;p<0.05
3、),且染鋁濃度和它們的含量呈負(fù)相關(guān),提示IL-2和TNF-α含量的減少可能是鋁致免疫毒性的機(jī)理之一。 5.染鋁組雞脾淋巴細(xì)胞內(nèi)一氧化氮合酶(NOS)活性、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量高于對(duì)照組,超氧化物岐化酶(SOD)和谷胱苷肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性低于對(duì)照組,組間差異顯著或極顯著(p<0.01;p<0.05),且呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系。說(shuō)明鋁可引發(fā)雞脾臟淋巴細(xì)胞氧化脅迫,進(jìn)而發(fā)揮其免疫細(xì)胞毒作用。 6.應(yīng)
4、用流式細(xì)胞術(shù)和吖啶橙-溴化乙錠(AO/EB)雙熒光染色法分別從生化改變和形態(tài)學(xué)角度檢測(cè)了鋁致雞脾臟淋巴細(xì)胞凋亡情況。隨染鋁濃度的增加,淋巴細(xì)胞膜皺縮、出芽、胞漿稀少、染色體固縮、邊聚、碎裂等典型凋亡特征的細(xì)胞數(shù)逐漸增多;G0/G1期細(xì)胞數(shù)量逐漸增加,S和G2/M期細(xì)胞數(shù)量逐漸減少,細(xì)胞增殖指數(shù)降低;凋亡指數(shù)和細(xì)胞凋亡率升高,染鋁組與對(duì)照組間比較差異均極顯著(p<0.01)。表明鋁可通過(guò)誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡發(fā)揮免疫毒性作用。 7.隨染
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