Galectin-3促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源的內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成的研究.pdf

1、目的:研究Galectin-3(Gal-3)對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)來源的內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成的影響,旨在為下肢缺血性疾病的治療和組織工程血管的構(gòu)建提供一個(gè)潛在的方法和選擇,為骨髓MSCs在血管外科的基礎(chǔ)研究及可能的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:密度梯度離心法分離純化SD大鼠骨髓MSCs,取第三代,加入10ng/ml血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和2ng/ml堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF),體外聯(lián)合誘導(dǎo)14d,進(jìn)行免

2、疫組織熒光染色和電鏡鑒定,觀察Ⅷ因子相關(guān)抗原(von Willebrand factor,vWF)的表達(dá)情況及細(xì)胞分化后細(xì)胞漿W-P小體的超微結(jié)構(gòu)。然后用低、中、高不同濃度Gal-3(0.1μg/mL,1.0μg/mL和5.0μg/mL)對骨髓MSCs來源的內(nèi)皮細(xì)胞分別作用24h。
　　1.采用MTT比色法觀察不同濃度Gal-3對骨髓MSCs來源的內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響;
　　2.利用流式細(xì)胞儀檢測不同濃度Gal-3對骨髓MSC

3、s來源的內(nèi)皮細(xì)胞DNA細(xì)胞周期的變化;
　　3.利用小管形成實(shí)驗(yàn)在matrigel培養(yǎng)基上觀察不同濃度Gal-3對骨髓MSCs來源的內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的影響。
　　結(jié)果:1.中、高濃度Gal-3組吸光度(OD)分別為0.3002±0.0159和0.3514±0.0133,較對照組OD值(0.2339±0.0041)明顯增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);
　　2.流式細(xì)胞術(shù)DNA細(xì)胞周期顯示低、中、高濃度Gal-3組S

4、期細(xì)胞比例(％)分別為:29.42±0.45,34.56±0.82和52.58±2.84,較對照(20.40±1.81)顯著增加(P<0.05),中、高濃度Gal-3組G2M期細(xì)胞分別為:4.88±1.12和5.26±0.45,較對照組(1.90±1.74)比例增加(P<0.05);細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)分別為32.45±0.94、39.44±0.75和57.84±2.52,與對照組(22.30±3.12)相比差異有顯著性(P<0.05)