人TNF-α嵌合抗體體外親和力成熟作用研究.pdf

1、該論文的創(chuàng)新點(diǎn):通過不同試驗(yàn)方法體外獲得親和力提高的新型抗人TNF-α嵌合抗體,并保持抗體的中和功能不變;建立基于抗原抗體相互識(shí)別的立體結(jié)構(gòu)信息預(yù)測(cè)判斷抗體親和力及抗原識(shí)別位點(diǎn)的新方法;嘗試在計(jì)算機(jī)模建基礎(chǔ)上,通過定點(diǎn)突變進(jìn)一步提高抗體親和力.人腫瘤壞死因子α(hTNFα)是一種由單核、巨噬、T淋巴、中性粒、肥大或內(nèi)皮細(xì)胞分泌產(chǎn)生的細(xì)胞因子,可介導(dǎo)多種生物學(xué)活性.當(dāng)hTNF-α在體內(nèi)的大量產(chǎn)生和釋放可引起機(jī)體免疫平衡失調(diào),并可與其它炎癥

2、因子一起產(chǎn)生多種病理損傷.該研究組于上世紀(jì)八十年代已經(jīng)制備得到抗hTNFα鼠源單克隆抗體(McAb)Z12,具有中和hTNFα細(xì)胞毒性功能,其親和力在K<,a>=8×10<'7>L/mol.在其人源化過程中,抗體的親和力有顯著地降低.該課題借助鏈替換(Chain Shuffling)方法,以鼠源抗體Z12為母本,通過噬菌體抗體庫技術(shù)親和篩選,借助計(jì)算機(jī)合理設(shè)計(jì)獲得高親和力嵌合抗體CH22,以期達(dá)到在保持抗體中和活性的同時(shí)顯著提高抗體親和

3、力的目的.同時(shí)借助計(jì)算機(jī)模建得到的抗原(hTNF-α)與抗體(CH22)相互作用的立體結(jié)構(gòu)信息,通過點(diǎn)突變得到新的人源化抗體,進(jìn)一步提高抗體親和力和抗體中和活性.通過以上研究,獲得抗hTNF-α高親和力嵌合抗體,與Z12比較親和力最高提高750倍,比Remicade(R)親和力提高6倍;其識(shí)別hTNF-α功能表位不同于Remicade(R),但中和hTNF-α活性能力與Remicade(R)相同.嵌合抗體CH22與已公開發(fā)表的抗體均有所