補腎活血固齒方對成骨細胞生物活性影響的實驗研究.pdf

1、牙周炎是以牙周袋形成、袋壁炎癥、牙槽骨吸收、牙齒松動為主要特征的口腔科常見病，是導(dǎo)致成年人牙齒喪失的主要原因。中藥治療牙周炎有著悠久歷史，多年來我科發(fā)現(xiàn)腎精虧虛型牙周炎患者的比例占絕大多數(shù)，應(yīng)用補腎活血固齒方治療該型牙周炎患者，療效顯著，但其作用機理不明了。根治牙周炎的關(guān)鍵是通過成骨細胞和破骨細胞的調(diào)節(jié)作用阻止牙槽骨吸收或促進牙槽骨的再生。補腎活血固齒方對成骨細胞是否有作用，機制如何，有待研究。離體成骨細胞培養(yǎng)技術(shù)，為藥物研究提供了一種

2、有效的方法。骨鈣素(osteocalcin，OCN)是成骨細胞特異合成和分泌的一種非膠原骨蛋白，其生理功能是保持骨的正常礦化，被認(rèn)為是成骨細胞分化的主要指標(biāo)，也是骨形成或骨轉(zhuǎn)換的重要標(biāo)志。本研究從補腎活血固齒方對成骨細胞增殖分化及超微結(jié)構(gòu)的影響，探究中藥治療牙周炎的作用機制，為臨床應(yīng)用補腎活血固齒方治療牙周炎提供理論依據(jù)。
　　目的:通過在倒置顯微鏡下觀察補腎活血固齒方對小鼠顱頂前成骨細胞MC3T3-E1細胞形態(tài)的影響，流式細胞術(shù)

3、檢測補腎活血固齒方對MC3T3-E1增殖的影響，透射電鏡觀察補腎活血固齒方對MC3T3-E1超微結(jié)構(gòu)的影響以及125I放射免疫法檢測補腎活血固齒方對OCN水平的影響，研究補腎活血固齒方對成骨細胞增殖、分化影響，探究中藥治療牙周炎的作用機制。
　　方法:
　　1.體外培養(yǎng)MC3T3-E1。
　　2.補腎活血固齒方按體表面積折算等效劑量灌胃大鼠，制備含藥血清;生理鹽水灌胃大鼠，制備無藥血清作為對照組，10％胎牛血清為空白對

4、照組。
　　3.用10％含藥血清、無藥血清、胎牛血清分別培養(yǎng)MC3T3-E1細胞24h、48h、72h，倒置顯微鏡下觀察補腎活血固齒方對MC3T3-E1細胞形態(tài)的影響。
　　4.用10％含藥血清、無藥血清、胎牛血清分別培養(yǎng)MC3T3-E1細胞，流式細胞儀檢測24h、48h、72h時細胞周期變化。
　　5.分別用10％無藥血清及含藥血清培養(yǎng)MC3T3-E1細胞14d后，透射電鏡下觀察此時細胞超微結(jié)構(gòu)。
　　6.用1

5、0％含藥血清、無藥血清、胎牛血清分別培養(yǎng)MC3T3-E1細胞，檢測24h、48h、72h時細胞上清液中OCN的含量。
　　結(jié)果:
　　1.補腎活血固齒方對MC3T3-E1形態(tài)無明顯影響。
　　2.含藥血清對細胞的增殖無明顯影響(p＞0.05)。
　　3.經(jīng)無藥血清作用14天MC3T3-E1呈前成骨細胞樣表型，細胞質(zhì)內(nèi)細胞器高爾基體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)不發(fā)達。MC3T3-E1經(jīng)含藥血清作用14天，呈成骨細胞樣表型，細胞

6、表面突起較多，細胞質(zhì)內(nèi)細胞器高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體發(fā)達，具有良好的的分泌功能，細胞代謝活躍。
　　4.MC3T3-E1經(jīng)含藥血清、無藥血清、胎牛血清組分別作用后，含藥血清組細胞上清液中OCN水平增加(p＜0.05)。并且隨著作用時間的延長，藥物作用效果顯示出時間依賴效應(yīng)。
　　結(jié)論:
　　1.補腎活血固齒方對MC3T3-E1的形態(tài)無影響，對MC3T3-E1的增殖無影響。MC3T3-E1經(jīng)補腎活血固齒方作用后，其超微結(jié)