鵝細(xì)小病毒VP3-ELISA和NS2-ELISA檢測方法的建立及抗體消長規(guī)律的測定.pdf

1、本試驗(yàn)通過原核表達(dá)載體pET-30a，成功構(gòu)建了pET-30a-NS2重組質(zhì)粒，通過大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)GPV-NS2蛋白；對表達(dá)GPV-VP3蛋白的陽性菌鑒定正確，通過Ni-NTA系統(tǒng)對兩種蛋白分別進(jìn)行純化，以純化的NS2蛋白和VP3蛋白為檢測抗原建立兩種間接ELISA檢測方法，并對其進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳反應(yīng)條件。我們應(yīng)用建立的VP3-ELISA和NS2-ELISA兩種檢測方法分別對實(shí)驗(yàn)免疫的鵝血清抗體進(jìn)行檢測。結(jié)果表明VP3蛋白的抗體

2、在免疫后第五周達(dá)到最高峰，之后略有下降，可持續(xù)到第十四周。NS2蛋白的抗體在免疫后第四周達(dá)到最高峰，可持續(xù)到第十四周。比較這兩種蛋白的抗體消長規(guī)律可見，非結(jié)構(gòu)蛋白NS2的抗體最高峰較結(jié)構(gòu)蛋白VP3的早出現(xiàn)一周。通過與中和試驗(yàn)比較，建立的VP3-ELISA檢測結(jié)果可以反映中和效價(jià)變化規(guī)律，有望代替中和試驗(yàn)。 本研究建立了VP3-ELISA和NS2-ELISA檢測方法，并對鵝細(xì)小病毒免疫后的抗體尤其是非結(jié)構(gòu)蛋白進(jìn)行監(jiān)測，為鵝細(xì)小病毒