廣譜基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑多西環(huán)素對高血壓大鼠主動脈結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、目的：大動脈硬化是高血壓發(fā)展過程中的增齡性改變之一。彈力蛋白和膠原是動脈壁的兩種主要成分，其正常代謝受多種酶系調(diào)控，其中最重要的是基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinases，MMPs)系統(tǒng)。有研究顯示，在高血壓的發(fā)展中，主動脈中的MMPs活性增加；但其與高血壓主動脈重塑的關(guān)系尚無定論。動脈瘤是血管的一種外向性重塑；近來的研究顯示MMPs的活性增高是動脈瘤發(fā)展乃至破裂的重要原因；相反，應(yīng)用非特異性MMPs抑制劑(多

2、西環(huán)素)可以有效延緩動脈瘤體的進行性增大。因此，本研究旨在利用多西環(huán)素的非特異性MMPs抑制劑特性，研究該藥對高血壓性主動脈重塑的影響。 方法：80只7周齡雄性卒中易感型自發(fā)性高血壓大鼠(Stroke-Prone SpontaneouslyHypertensive Rats，SHR-SPs)隨機分為藥物干預(yù)組和對照組，每組40只，陰性對照采用同周齡雄性WKY大鼠(Wistar-Kyoto Rats，WKY)。藥物干預(yù)組每天經(jīng)自由

3、飲水給予多西環(huán)素(Doxycycline，DOX，30 mg/Kg//day)，經(jīng)去離子水溶解，每周按體重變化調(diào)整飲水量；對照組每日給予等量去離子水。干預(yù)期間定期觀察大鼠體重、無創(chuàng)尾壓。當(dāng)對照組病死率達到50％時，觀察終止。取主動脈于液氮速凍后保存于-80℃中，一部分組織用于制備石蠟切片并進行蘇木素-伊紅(Hematoxylin and Eosin，HE)、維多利亞藍(Victoria Blue，彈力纖維特異性染色)和voD Kossa

4、銀(異常鈣沉積染色)病理染色，另一部分組織用于交聯(lián)膠原測定、Gelatin Zymography、Western Blot分析。病理圖像經(jīng)數(shù)字CCD掃描后，用圖像分析軟件計算血管內(nèi)、外膜周長、血管中膜面積、彈力纖維占中膜面積百分比、鈣沉積占中膜面積百分比。 結(jié)果： 1.Gelatin Zymography 和 Westem Blot 分析顯示多西環(huán)素可以抑制主動脈MMP-2和MMP-9的活性，但對MMP-2的蛋白表達水平

5、無明顯影響。Gelatin Zymography分析結(jié)果顯示：與對照組比較，DOX組MMP-2和MMP-9的活性均顯著降低(MMP-2：3.15±0.23 vs.2.43±0.14，P<0.05；MMP-9：14.1±1.50 vs.9.71±1.31，P<0.05)。Western Blot分析：與對照組比較，DOX組MMP-2的蛋白表達水平無統(tǒng)計學(xué)差異(0.625±0.1 94 vs.0.576±0.1 65，P>0.05)。

6、 2.維多利亞藍染色病理圖像分析：對照組的主動脈彈力纖維占中膜面積百分比較WKY組升高[(5.72±3.87)％ vs.(2.19±0.997)％，P<0.05]。與對照組比較，DOX組彈力纖維占中膜面積百分比顯著降低[(5.72±3.87)％ vs.(3.46±1.62)％，P<0.05]。 3.交聯(lián)膠原濃度測定：對照組、DOX組主動脈交聯(lián)膠原濃度均較WKY組顯著降低(28.0±8.71μg/mg，26.4±6.98μg/m

7、g VS.55.2±13.3μg/mg，P<0.05)。對照組與DOX組交聯(lián)膠原濃度無統(tǒng)計學(xué)差異(28.0±8.71μg/mg vs.26.4±6.98μg/mg，P>0.05)。 4.von Kossa銀染色病理圖像分析：對照組、DOX組主動脈鈣沉積占中膜面積百分比均較 WKY 組明顯升高[(0.960±0.999)％，(0.688±0.71 8)％ vs.(0.232±0.237)％，P<0.05]。與對照組比較，DOX組鈣

8、沉積占中膜面積百分比雖無統(tǒng)計學(xué)差異，但存在降低的趨勢[(0.960±0.999)％VS.(0.688±0.718)％，P=0.177]。 5.各組間主動脈內(nèi)膜周長、外膜周長和血管中膜面積無明顯差異：對照組、WKY、DOX組間內(nèi)膜周長無統(tǒng)計學(xué)差異(6322.4±640.2μm vs.6127.4±331.1μm vs.6294.4±271.6μm，P>0.05)。對照組、DOX組的外膜周長較WKY組存在增大的趨勢(7418.9±7

9、86.2μm，7434.0±392.2μm VS.6952.3±493.1μm，P=0.132，P=0.121，respectively)。對照組和DOX組外膜周長無統(tǒng)計學(xué)差異(7418.9±786.2μm vs.7434.0±392.2μm，P>0.05)。對照組、DOX組的血管中膜面積較WKY組存在增加的趨勢(905547.6±344201.9gm<,2>，990607.8±1 75468.7μm<,2> vs.757559.2±2

10、91711.6μm<'2>，P=0.268，P=-0.09，respectively)。對照組和DOX組血管中膜面積無統(tǒng)計學(xué)差異(905547.6±344201.9μm<'2> vs.990607.8±175468.7μm<,2>，P>0.05)。 結(jié)論：廣譜基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑多西環(huán)素可以抑制SHR-SPs主動脈中MMP-2、MMP-9活性，但對MMP-2蛋白表達水平和膠原沉積量無明顯影響，并可使彈力纖維含量降低。因此，在血壓