益生屎腸球菌HDRsEf1抗ETEC腸道感染作用的研究.pdf

1、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（Enterotoxigenic Escherichia, ETEC）是引起動(dòng)物和人體腹瀉的重要病原菌之一，嚴(yán)重影響畜禽養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)效益。屎腸球菌(Enterococcusfaecium)被認(rèn)為是具有益生功能的腸道有益菌群，本實(shí)驗(yàn)以分離自健康仔豬糞便且具有良好益生功能的菌株-屎腸球菌HDRsEf1為研究對(duì)象，分析其對(duì)ETEC腸道感染的保護(hù)作用機(jī)制，為HDRsEf1應(yīng)用于防控動(dòng)物腸道感染性疾病提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。

2、>　　首先采用ETEC感染小鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究了HDRsEf1對(duì)ETEC腸道感染的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)將40只ICR小鼠隨機(jī)分為4組，對(duì)照組:每天灌胃PBS;預(yù)防組:攻毒前10d每天均為HDRsEf1菌液，第11d給予單劑量的ETEC攻毒，第12～21 d灌胃PBS;模型組:第11d給予單劑量ETEC攻毒，第1～10 d和12～21 d均灌胃PBS;治療組:第1～10d灌胃PBS，第11d灌胃ETEC攻毒，第12～21 d每天均為HDRsEf

3、1。其次通過(guò)ETEC體外感染小鼠空腸上皮細(xì)胞(MODE-K)實(shí)驗(yàn)，初步研究了HDRsEf1調(diào)控OCLN的分子機(jī)制。試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論如下:
　　腹瀉率、體重變化:ETEC攻毒后3d，模型組腹瀉率為66.7％，小鼠體重為24.30±0.18g相比于對(duì)照組25.2±0.49 g顯著下降(P＜0.05)，預(yù)防組小鼠腹瀉率為33.3％低于模型組;攻毒后10 d，預(yù)防組小鼠體重為27.77±0.25 g相比于模型組25.57±0.57 g(P＜

4、0.05)差異顯著，治療組小鼠腹瀉率為16.7％相比于模型組(50％)顯著降低(P＜0.05)，治療組平均體重為27.50±0.26 g顯著高于模型組(P＜0.05)。
　　腸道炎癥變化:ETEC攻毒后1d，模型組炎癥評(píng)分結(jié)果為2.08±0.38（高于2分判定為中度炎癥）而預(yù)防組為1.50±0.25（低于2分）;攻毒后10 d，預(yù)防組炎癥評(píng)分結(jié)果為1.50±0.43顯著低于模型組2.50±0.43(P＜0.05)，治療組為2.0±

5、0.25。攻毒后1d，模型組小鼠空腸組織IL-1β、TNF-α、IFN-γ表達(dá)上升(P＜0.05)，IL-10表達(dá)下降(P＜0.05)，與模型組相比預(yù)防組IL-1β、TNF-α、IFN-γ表達(dá)下降(P＜0.05)，IL-10表達(dá)升高(P＜0.05);攻毒后10 d，治療組下調(diào)了TNF-α和IFN-γ的表達(dá)(P＜0.05)，上調(diào)了IL-10的表達(dá)(P＜0.05)。
　　腸道化學(xué)屏障變化:ETEC攻毒后1d，模型組空腸IgA陽(yáng)性B細(xì)胞

6、數(shù)和MUC-2、LYZ-2表達(dá)顯著降低(P＜0.05)，與模型組相比預(yù)防組空腸IgA陽(yáng)性B細(xì)胞數(shù)和MUC-2、LYZ-2表達(dá)均顯著升高(P＜0.05);攻毒后10d，與模型組相比預(yù)防組空腸IgA陽(yáng)性B細(xì)胞數(shù)和MUC-2、LYZ-2表達(dá)顯著升高(P＜0.05)，治療組空腸IgA陽(yáng)性B細(xì)胞數(shù)和MUC-2表達(dá)也顯著升高(P＜0.05)。
　　腸道緊密連接蛋白表達(dá)變化:分別從mRNA水平和蛋白水平分析了HDRsEf1對(duì)ETEC感染小鼠空腸

7、OCLN、ZO-1表達(dá)的影響，ETEC攻毒后1d模型組OCLN表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)，ZO-1的表達(dá)沒(méi)有明顯變化，預(yù)防組OCLN表達(dá)升高(P＜0.05);攻毒后10d，預(yù)防組和治療組顯著上調(diào)了OCLN的表達(dá)(P＜0.05)。
　　HDRsEf1調(diào)控OCLN的分子機(jī)制:細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)證實(shí)HDRsEf1能夠拮抗ETEC對(duì)OCLN的下調(diào)，變化趨勢(shì)與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致;OCLN啟動(dòng)子熒光素酶表達(dá)載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)HDRsEf1能夠顯著拮抗