深圳市2007年流感流行特征及病毒分子變異研究.pdf

1、目的：
　　了解深圳市2007年流感流行特征,探討流感病毒血凝素蛋白重鏈(HA1)區(qū)基因特性、抗原變異及其與流感流行的關(guān)系,為流感防治提供科學(xué)依據(jù)。
　　材料與方法：
　　收集深圳市2007年流感樣病例和流感樣病例暴發(fā)疫情資料,用EXECL和SAS8.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)流感樣病例就診百分比進(jìn)行時(shí)間趨勢(shì)、年齡分布情況統(tǒng)計(jì)分析,并設(shè)計(jì)流感監(jiān)測(cè)預(yù)警線和平均水平線。采集流感樣病例鼻咽拭子標(biāo)本,同時(shí)接種狗腎傳代細(xì)胞和9~11日齡雞胚的

2、羊膜腔和尿囊腔進(jìn)行流感病毒分離培養(yǎng),用紅細(xì)胞凝集及凝集抑制試驗(yàn)實(shí)現(xiàn)病毒滴度及型別鑒定。采用隨機(jī)整群抽樣法于流感流行期前、后采集一般人群血清了解深圳人群的血清抗體水平。對(duì)所有分離病毒提取RNA,用RT-PCR擴(kuò)增HA1區(qū)基因片段,產(chǎn)物純化后測(cè)序;用DNASTAR軟件、SIMMONIC軟件和MEGA3.1軟件進(jìn)行核苷酸—氨基酸序列分析、同源性比較、基因進(jìn)化樹構(gòu)建等分子變異研究,并與WHO推薦北半球疫苗株和國(guó)家代表株進(jìn)行比較,揭示流感病毒HA

3、1區(qū)基因變異、抗原性改變及其與流感流行的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.深圳市2007年流感流行特征2007年深圳市流感樣病例(influenza-like illness,簡(jiǎn)稱ILI)就診百分比曲線呈單峰分布,流感活動(dòng)高峰主要分布在4~7月,ILI就診百分比于第25周達(dá)到峰值11.22％,超過(guò)預(yù)警線值10.86％,較2005、2006年明顯提高,且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng);ILI主要集中在0~14歲年齡組兒童,占流感樣病例總數(shù)的72.97％

4、;學(xué)校流感流行高峰較早出現(xiàn);深圳流感監(jiān)測(cè)預(yù)警線具有一定的季節(jié)性和靈敏度,能及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常值。2007年共報(bào)告流感樣病例暴發(fā)疫情50起,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè),35起流感病毒陽(yáng)性,其中A型29起,B型6起;時(shí)間上主要分布在3~6月,占92.0％,88.0％發(fā)生于中小學(xué)校。2007年共檢測(cè)流感樣病例鼻咽拭子標(biāo)本2831份,343份陽(yáng)性,分離率為12.12％;H1N1亞型、H3N2亞型、B型流感病毒所占構(gòu)成比分別為3.5％、62.68％和33.82

5、％;其中1~6月份以H3N2亞型為主要流行株,7~12月份則以B(Yamagata)系為主要流行株。月病毒分離率1~6月份逐步升高,6月份最高為28.38％,后按月遞減,與ILI就診百分比時(shí)間變化趨勢(shì)一致。結(jié)合往年資料發(fā)現(xiàn)主要流行株交替出現(xiàn)。2007年3、9月份共采集一般人群血清1700份,H3N2亞型血清抗體陽(yáng)性率最高,3、9月份分別為:65.82％和72.94％,經(jīng)檢驗(yàn)具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),這與2007年H3N2亞型病毒活動(dòng)

6、水平較高有關(guān);H1N1亞型、B(Victoria)系、B(Yamagata)系毒株3、9月份抗體陽(yáng)性率分別為46.98％、43.80％、43.84％、21.90％、41.18％和21.67％;除H3N2亞型外,其它三個(gè)型別流感病毒幾何平均滴度偏低。
　　2.深圳市2007年流感病毒血凝素蛋白重鏈區(qū)基因變異H3N2亞型流感病毒血凝素重鏈(HA1)區(qū)核苷酸同源性和基因進(jìn)化樹結(jié)果均顯示:2007年H3N2亞型毒株分為兩個(gè)分支,1~4月份

7、部分毒株與國(guó)家代表株A/JXDH/312/2006(H3N2)在一個(gè)分支,該部分毒株占1~4月份H3N2亞型分離株的33.33％;5月份之后的毒株與2008~2009年疫苗株A/Brisbane/10/2007(H3N2)為同一分支,并在流行上占優(yōu)勢(shì),該部分毒株占2007年H3N2亞型分離株的89.30％;2005~2006年毒株與2006~2007年度疫苗株A/Wisconsin/67/2005(H3N2)距離較近;A/Brisban

8、e/10/2007(H3N2)是從A/Wisconsin/67/2005(H3N2)進(jìn)化而來(lái)的抗原變異株。氨基酸位點(diǎn)是隨著時(shí)間發(fā)展逐步變化。與參照株A/Wisconsin/67/2005(H3N2)比較發(fā)現(xiàn),所有毒株發(fā)生D122N、1223V氨基酸替換,1~4月份部分毒株在抗原決定簇A區(qū)發(fā)生R142G和N144D氨基酸變異,該變異沒(méi)有被保留下來(lái),5月份之后的毒株發(fā)生G50E、K140I氨基酸替換;D122N、N144D氨基酸置換分別導(dǎo)致

9、增加和丟失一個(gè)糖基化位點(diǎn)。
　　受體結(jié)合位點(diǎn)氨基酸較保守。H1N1亞型流感病毒HA1區(qū)核苷酸同源性和基因進(jìn)化樹結(jié)果一致。HA1區(qū)基因進(jìn)化樹結(jié)果為2007年、2006年毒株和國(guó)家代表株A/GDLH/219/2006(H1N1)在一個(gè)分支,2005年毒株分為兩個(gè)分支,4月份之前分離株與A/NewCaledonia/20/1999(H1N1)為同一分支,5月份之后的分離株與A/SolomonIsland/3/2006(H1N1)為一支。

10、氨基酸序列分析顯示,2005年5月以后的大部分毒株出現(xiàn)以下氨基酸變異:T82K、Y94H、R146K、R209K和T267N,2006年5月份之后的毒株在抗原決定簇B區(qū)發(fā)生了A190T、H193Y和E195D氨基酸變異,同時(shí)也發(fā)生A區(qū)R146K的置換。所有毒株的糖基化和受體結(jié)合位點(diǎn)比較保守。
　　2007年B型流感病毒HA1區(qū)基因進(jìn)化樹分為B(Victoria)和B(Yamagata)兩個(gè)譜系,其中B(Victoria)系毒株與深

11、圳2006年分離株、本年度疫苗株B/Malaysia/2506/2006、國(guó)家代表株B/Shenzhen/155/2005同在一個(gè)分支;B(Yamagata)系毒株與國(guó)家代表株B/FJXL/54/2006距離最近,其次為2008~2009年度疫苗株B/Florida/4/2006。氨基酸位點(diǎn)分析顯示:B(Victoria)毒株發(fā)生S134P氨基酸變異,B(Yamagata)系毒株發(fā)生R48K、P108A、L131P和D197N氨基酸替換

12、;197-199糖基化位點(diǎn)變異頻率較高,76.66％的B(Yamagata)系毒株發(fā)生D197N氨基酸置換導(dǎo)致增加一個(gè)糖基化位點(diǎn)。
　　結(jié)論：
　　深圳市流感流行高峰在夏季;流感監(jiān)測(cè)預(yù)警線和平均水平線具有較好的季節(jié)性和靈敏度,能及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常值。低年齡組人群較易受流感病毒感染,學(xué)校流感監(jiān)測(cè)值得重視。深圳每年主要流感流行株交替出現(xiàn)。2007年深圳市H3N2亞型流感病毒的基因特性和抗原性已發(fā)生變化,引起該型病毒較高水平的流行,流感