健脾補(bǔ)腎活血法對糖尿病大鼠腎臟纖溶酶原激活物抑制物-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:健脾補(bǔ)腎活血方（由黃芪、黨參、白術(shù)、山藥、山茱萸、女貞子、旱蓮草、仙茅、仙靈脾、川芎、茯苓、紅花、當(dāng)歸、菟絲子、陳皮、木香、澤瀉組成）具有健脾補(bǔ)腎、活血化瘀的作用。導(dǎo)師張庚良教授經(jīng)多年臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用健脾補(bǔ)腎活血法對糖尿病早期患者能夠起到防治糖尿病腎臟病變的效果。本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，給予藥物干預(yù)，觀察健脾補(bǔ)腎活血法對糖尿病大鼠血糖、血脂、腎功能、24h尿白蛋白排泄率、腎臟組織病理形態(tài)學(xué)變化及腎臟纖溶酶

2、原激活物抑制物-1(PAI-1)表達(dá)的影響，初步探討本方保護(hù)腎組織的作用機(jī)制。
　　 方法:選用清潔級健康Wistar大鼠(雄性，體重約160～180g)46只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，正常對照組按體重隨機(jī)選取10只形成，其余大鼠用于復(fù)制糖尿病模型。按55mg/kg體重計(jì)算，單次腹腔注射1％的鏈脲佐菌素枸櫞酸緩沖液(枸櫞酸緩沖液為0.1 mmol/L，pH4.5)，正常對照組給予相當(dāng)體積的1％檸檬酸緩沖溶液注射。72h后尾靜脈

3、采血，測定血糖數(shù)值≥16.7mmol/L，大鼠尿量及飲水量明顯增多，即確定為糖尿病模型大鼠。
　　 將成模的大鼠隨機(jī)分為模型對照組、健脾補(bǔ)腎活血方組（簡稱中藥組），厄貝沙坦組（簡稱西藥組），每組12只。造模成功后的第三天，各治療組按成人劑量的10倍開始灌胃給藥，每日一次。中藥組給予健脾補(bǔ)腎活血中藥每日11 ml/kg體重（相當(dāng)于3.5g/ml生藥）灌胃，西藥組給予厄貝沙坦溶液每日3.3ml/kg體重（相當(dāng)于7.5mg/ml原藥）

4、灌胃，正常對照組與模型對照組均給予相應(yīng)中藥體積的生理鹽水灌胃。連續(xù)灌胃8周。處死前一天，用代謝籠留取大鼠24h尿液，記尿總量，并測定24h尿白蛋白排泄率。于末次灌胃后禁食不禁水12h，稱體重，2％戊巴比妥鈉20mg/kg體重腹腔注射麻醉大鼠后股動脈取血，檢測各組大鼠血糖、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)。處死動物，迅速取出右腎，去除包膜，濾紙吸干血跡后稱取重量，記錄腎重，計(jì)算腎重與體重的比值，即肥大

5、指數(shù)。將部分腎臟組織石蠟包埋，常規(guī)組織切片，行光鏡HE染色觀察腎小球病理形態(tài)改變。無菌操作留取部分腎組織作為標(biāo)本，4％多聚甲醛溶液中固定，免疫組化法測定纖溶酶原激活物抑制物-1的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、一般情況觀察
　　 一般情況包括大鼠的飲食量、飲水量、尿量、體重、精神狀態(tài)、皮毛及活動狀況。正常組大鼠飲食、飲水、尿量正常，體重增加明顯，精神良好，皮毛有光澤，動作自如。模型組大鼠則多飲、多食、多尿，形

6、體消瘦，精神萎靡，皮毛凌亂、枯黃，動作遲緩。有些大鼠隨時(shí)間推移出現(xiàn)糖尿病各種并發(fā)癥，如半身不遂、白內(nèi)障、四肢水腫等。兩個(gè)治療組即中藥組和西藥組大鼠的一般情況與模型組相比較有一定程度的改善。模型組、中藥組、西藥組最終死亡大鼠數(shù)分別為1只、2只、1只，主要死因或?yàn)楣辔覆划?dāng)所致?lián)p傷，或?yàn)榛ハ嗨阂Ф赂腥?，或?yàn)槠c不能進(jìn)食。
　　 2、血糖的變化
　　 模型組、中藥組及西藥組大鼠血糖均明顯高于正常組，有顯著性差異(P＜0.01)

7、;中藥組有一定的降糖作用，與模型組之間比較血糖明顯下降，且有顯著性差異(P＜0.01);而西藥組降糖效果不顯著，與模型組之間比較血糖下降不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3、血脂的變化
　　 模型組、中藥組及西藥組大鼠的TG和TC均明顯升高，與正常組相比有顯著性差異(P＜0.01);中藥組有一定的降血脂作用，與模型組比較血脂明顯下降，有顯著性差異(P＜0.01);而西藥組對血脂影響不大，與模型組比較無明顯的差

8、異(P＞0.05)。
　　 4、腎功能的變化
　　 模型組、中藥組及西藥組的尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)與正常組相比明顯升高(P＜0.01);與模型組相比，兩個(gè)治療組均能降低BUN、Scr，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）;而中藥組與西藥組的腎功能指標(biāo)無顯著的差異(P＞0.05)。
　　 5、24h尿白蛋白排泄率的變化
　　 與正常組比較，模型組24h尿白蛋白排泄率明顯升高(P＜0.01)，中藥組24

9、h尿白蛋白排泄率與模型組比較明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，與西藥組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 6、肥大指數(shù)（腎重/體重）比值的變化
　　 模型組的腎重/體重比值明顯高于正常組(P＜0.01)。厄貝沙坦組與健脾補(bǔ)腎活血方組腎重/體重的比值明顯低于模型組，與模型組比較有顯著性差異(p＜0.01)。而中藥組與西藥組之間無顯著性的差異(P＞0.05)。
　　 7、對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)

10、的影響
　　 正常對照組腎小球結(jié)構(gòu)完整，未見腎小球增大及細(xì)胞數(shù)增多，腎小球毛細(xì)血管基底膜、系膜、基質(zhì)均未見明顯異常。模型組可見腎小球明顯增大，細(xì)胞核數(shù)目增加，腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜細(xì)胞輕度增生，系膜區(qū)增寬，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，部分腎小管出現(xiàn)細(xì)胞空泡變性。中藥組及西藥組大鼠腎組織病變與模型組比較有明顯改善。
　　 8、對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎臟纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表達(dá)的影響
　　 與正常組比較

11、，模型組及兩個(gè)治療組的大鼠腎臟中纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的表達(dá)明顯高于正常組(P＜0.01）。經(jīng)藥物干預(yù)后，兩個(gè)治療組與模型組比較，PAI-1表達(dá)均明顯減少(P＜0.01)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中藥組與西藥組比較無顯著差異(P＞0.05）。提示厄貝沙坦與健脾補(bǔ)腎活血方對糖尿病腎臟的保護(hù)作用，可能是通過下調(diào)PAI-1的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。
　　 結(jié)論:
　　 1、健脾補(bǔ)腎活血方可以明顯改善糖尿病大鼠的一般狀態(tài)，降低血