健脾補(bǔ)腎活血方對(duì)糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：本研究通過腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)復(fù)制糖尿病大鼠模型，應(yīng)用健脾補(bǔ)腎活血方對(duì)糖尿病大鼠進(jìn)行干預(yù)治療，通過觀察該藥對(duì)糖尿病大鼠模型血糖、血脂、腎功能、24小時(shí)尿白蛋白排泄率、腎臟病理形態(tài)學(xué)、腎重/體重的比值、血漿及腎組織中Ang Ⅱ含量、以及腎組織中TGF-β1表達(dá)的改變，研究健脾補(bǔ)腎活血方對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及其可能機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供可靠的研究基礎(chǔ)。 方法：選用健康SD大鼠(雄性，體重180±20g)46只，普

2、通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，檢測(cè)血糖、尿糖均為陰性，按體重隨機(jī)分為正常組(10只)、模型組(12只)、苯那普利組(12只)、健脾補(bǔ)腎活血方組(12只)，除正常組外，其它三組均采用腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)復(fù)制糖尿病模型，造模72小時(shí)后測(cè)血糖超過16.7mmol/L即確定為糖尿病模型大鼠。正常組注射相當(dāng)體積的檸檬酸緩沖液。造模第三天，模型組、苯那普利組、健脾補(bǔ)腎活血方組，分別給予自來水、苯那普利10 mg/kg、健脾補(bǔ)腎活血方灌胃7.5 mg

3、/kg，每日一次。正常組也給予相同體積的自來水灌胃。實(shí)驗(yàn)期間，各組動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。于實(shí)驗(yàn)第8周，大鼠用代謝籠留取24h尿液，用放射免疫法測(cè)定尿微量白蛋白，計(jì)算尿白蛋白排泄率(UAER)，并測(cè)尿肌酐(Ucr)。于第8周末，全部動(dòng)物被處死，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠血糖、總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)，計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)。用放免法測(cè)血漿AngⅡ含量。大鼠麻醉后，迅速取出雙腎，去包膜后

4、，雙腎稱重，并測(cè)腎重/體重比值。左腎固定后石蠟包埋，切成4μm厚的切片行HE巳染色和PAS染色。光鏡下觀察腎臟病理形態(tài)學(xué)變化。右腎于矢狀面縱向切開后，取部分右腎組織勻漿后離心，取上清備測(cè)腎組織Ang Ⅱ含量。右腎余組織置10％福爾馬林溶液中，常規(guī)固定，石蠟包埋切片備用，待用免疫組化法檢測(cè)TGF-β1在腎小球及腎小管的表達(dá)情況，并用病理圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果： (1)血糖：造模后糖尿病各組大鼠均出現(xiàn)血糖增高，與

5、正常組比較有顯著性差異，健脾補(bǔ)腎活血方組有一定的降糖作用，與模型組比較有顯著性差異，苯那普利組降糖效果不顯著，健脾補(bǔ)腎活血方組與其比較有顯著性差異。 (2)血脂：第8周末檢測(cè)血脂，除正常組外，其余各組均出現(xiàn)血脂增高，與正常組比較均有顯著性差異。苯那普利治療對(duì)血脂影響不大，與模型組比較無顯著性差異。健脾補(bǔ)腎活血方治療能降低TG和TC水平，與模型組比較有顯著性差異。 (3)腎功能：模型組BUN、Scr、Ccr與正常組比較有顯

6、著性差異。健脾補(bǔ)腎活血方組和苯那普利組均能降低BUN、Scr、Ccr水平，與模型組比較有顯著性差異，兩組間比較無顯著性差異。 (4)24h尿白蛋白排泄率：第8周時(shí)，模型組24h尿白蛋白排泄率明顯高于正常組，健脾補(bǔ)腎活血方組24h尿白蛋白排泄率明顯降低，與模型組比較有顯著性差異，與苯那普利組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (5)腎重/體重的比值：模型組腎重/體重的比值明顯高于正常組。苯那普利組與健脾補(bǔ)腎活血方組腎重/體重的比值明顯低于

7、模型組，與模型組比較有顯著性差異。兩者之間無顯著性差異。 (6)血漿及腎組織中Ang Ⅱ含量：模型組血漿及腎組織中Ang Ⅱ含量均高于正常組。苯那普利組血漿及腎組織中Ang Ⅱ含量明顯低于模型組。健脾補(bǔ)腎活血方組Ang Ⅱ含量低于模型組，但高于苯那普利組。 (7)腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察：模型組光鏡下可見腎小球體積增大，球囊增大呈分葉狀，腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜細(xì)胞增生，系膜區(qū)增寬，系膜基質(zhì)PAS染色呈強(qiáng)陽性，腎小管上

8、皮細(xì)胞腫脹變性(見附圖12、13、14、15)。健脾補(bǔ)腎活血方組及苯那普利組大鼠腎組織病變?nèi)缒I小球基底膜增厚及系膜細(xì)胞增生比模型組有明顯改善，系膜區(qū)PAS染色陽性物質(zhì)明顯減少(見附圖16、17、18、19)。 (8)腎組織中TGF-β1免疫組化結(jié)果：正常大鼠的腎小球臟層上皮細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞有少量TGF-β1陽性表達(dá)。模型組大鼠腎小管上皮細(xì)胞TGF-β1表達(dá)顯著增加，腎小球臟層上皮細(xì)胞TGF-β1表達(dá)也增加。健脾補(bǔ)腎活血方組和

9、苯那普利組較模型組的表達(dá)明顯減少，與模型組比較有明顯減少。健脾補(bǔ)腎活血方組和苯那普利組比較無明顯差異。 結(jié)論： 1.健脾補(bǔ)腎活血方可降低糖尿病大鼠血糖、改善脂代謝、降低BUN、Scr及Ccr，保護(hù)腎功能。 2.健脾補(bǔ)腎活血方阻止糖尿病大鼠腎臟肥大，改善腎臟形態(tài)結(jié)構(gòu)的同時(shí)還可以降低血管緊張素水平和TGF-β1的表達(dá)，一定程度上可改善糖尿病的腎損害，延緩腎臟纖維化進(jìn)程。 3.健脾補(bǔ)腎活血方對(duì)糖尿病大鼠模型的干