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文檔簡介
1、趨化因子10(CXCL10)是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的趨化因子,與其唯一的受體趨化因子受體3(CXCR3)結(jié)合后,不僅可以調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移、生長,分化和死亡等多種細(xì)胞功能,還可調(diào)節(jié)病毒感染、炎癥反應(yīng)、腫瘤、損傷修復(fù)、自身免疫性疾等多種病理功能。CXCL10/CXCR3軸在多種由病毒感染的肺損傷中具有重要作用,PRRSV感染豬肺組織后造成肺損傷是導(dǎo)致死亡的主要原因,而關(guān)于CXCL10/CXCR3軸參與肺損傷過程的機制還尚未清楚。本研究檢測PRRSV人工
2、感染和臨床感染的豬肺組織中CXCL10、CXCR3的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)變化,進(jìn)一步建立細(xì)胞模型,從組織和細(xì)胞水平分別檢測了趨化因子CXCL10、趨化因子受體CXCR3在PRRSV感染的肺損傷中的表達(dá)。研究內(nèi)容包括以下幾個方面:
1.感染PRRSV豬肺組織中CXCL10和CXCR3的表達(dá)變化檢測
利用實時熒光定量PCR(qPCR)的方法,分別檢測了人工感染PRRSV和臨床感染PRRSV豬肺組織中CXCL10和CXC
3、R3 mRNA的表達(dá)量。人工感染的肺組織CXCL10和CXCR3 mRNA呈現(xiàn)高表達(dá);臨床感染組中CXCL10 mRNA呈高表達(dá),而CXCR3 mRNA呈低表達(dá)。利用蛋白免疫印跡法(WB)方法,分別檢測人工感染PRRSV和臨床感染PRRSV的肺組織中CXCR3蛋白的表達(dá)量,人工感染PRRSV的肺組織中CXCR3蛋白的表達(dá)量增加;臨床感染PRRSV肺組織中CXCR3蛋白的表達(dá)量減少。以上結(jié)果說明PRRSV感染造成的肺損傷影響CXCL10和
4、CXCR3的表達(dá)。
2.聚肌苷酸-聚胞苷酸Poly(I∶C)、脂多糖(LPS)刺激巨噬細(xì)胞調(diào)節(jié)CXCL10和CXCR3的表達(dá)
采用qPCR方法檢測Poly(I∶C)、LPS分別刺激巨噬細(xì)胞24后CXCL10和CXCR3 mRNA的表達(dá)量。Poly(I∶C)刺激后,巨噬細(xì)胞中CXCL10和CXCR3mRNA的表達(dá)量均顯著升高,LPS刺激后,巨噬細(xì)胞中CXCL10和CXCR3 mRNA的表達(dá)量均顯著降低;WB的方法檢測C
5、XCR3蛋白的表達(dá)量,Poly(I∶C)刺激后巨噬細(xì)胞中CXCR3蛋白的表達(dá)量顯著升高,LPS刺激后巨噬細(xì)胞中CXCR3蛋白的表達(dá)量顯著降低。結(jié)果表明,Poly(I∶C)能促進(jìn)CXCL10和CXCR3的表達(dá);LPS能抑制CXCL10和CXCR3的表達(dá)。
3.脂多糖(LPS)抑制聚肌苷酸-聚胞苷酸Poly(I∶C)誘導(dǎo)CXCL10和CXCR3的表達(dá)
采用qPCR方法檢測Poly(I∶C)+LPS刺激巨噬細(xì)胞24小時后C
6、XCL10和CXCR3 mRNA的表達(dá)量,和Poly(I∶C)單獨刺激細(xì)胞相比較,CXCL10和CXCR3mRNA的表達(dá)量均顯著降低;WB的方法檢測CXCR3蛋白的表達(dá)量,CXCR3蛋白的表達(dá)量降低,但統(tǒng)計學(xué)差異不顯著。結(jié)果表明,LPS能抑制Poly(I∶C)誘導(dǎo)的CXCL10和CXCR3表達(dá)。
4.Poly(I∶C)、LPS和Poly(I∶C)-LPS共刺激巨噬細(xì)胞后,對細(xì)胞細(xì)胞活力的影響
采用活細(xì)胞分析法(MTT
7、法)研究Poly(I∶C)、LPS和Poly(I∶C)-LPS共刺激巨噬細(xì)胞后對細(xì)胞活力的影響。Poly(I∶C)刺激細(xì)胞后細(xì)胞活力無明顯變化,LPS和Poly(I∶C)-LPS共刺激細(xì)胞后細(xì)胞活力降低至60%。結(jié)果說明LPS處理細(xì)胞可能通過影響細(xì)胞活率來影響CXCL10和CXCR3的表達(dá)影響。
綜上,用Poly(I∶C)刺激巨噬細(xì)胞可以模擬人工感染PRRSV豬肺組織中CXCL10和CXCR3的表達(dá)變化??梢岳迷摷?xì)胞模型研究
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