新型人生長(zhǎng)激素釋放激素類似肽構(gòu)效關(guān)系的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 1 0 級(jí)碩士學(xué)位論文新型人生長(zhǎng)激素釋放激素類似肽構(gòu)效關(guān)系的研究S t r u c t u r e a n d F u n c t i o n R e l a t i o n s h i po f N e w h G H R HA n a l o g s課題來源：國家自然科學(xué)基金( 編號(hào)：8 1 0 0 1 3 9 1 )學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院陳飛周東教授神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)型碩士研究生南方醫(yī)科

2、大學(xué)2 0 1 4 年 5 月 6 日 廣州摘要與進(jìn)展在很大程度上改善了G H R H 上述不足之處，為相關(guān)的基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。目的選擇前期研究中構(gòu)建的肽及其二聚體，測(cè)定所有九種肽的釋放活性、特異性及受體結(jié)合能力，篩選出激素釋放特異和活性最高的G H R H 類似肽或二聚體。方法1 ．將已轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌B L 2 1 ( D E 3 ) 在L B 培養(yǎng)基中3 7 ' C 3 0 0 r p m發(fā)酵5 小時(shí)，加入

3、異丙基．B ．D ．硫代半乳糖苷( I T P G ) 誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá)5 小時(shí)。低溫離心機(jī)內(nèi)4 “ C1 0 0 0 0 r p m 離心5 分鐘收集大腸桿菌，稱重。將收集的表達(dá)產(chǎn)物，經(jīng)裂解細(xì)胞、洗滌、乙醇沉淀、酸水解、S P ·S e p h a d e xC - 2 5 和S e p h a d e x G - 2 5層析柱等方法純化G H R H ；通過高效液相色譜法分析G H R H 類似肽純度，通過質(zhì)譜法測(cè)定G H

4、 R H 類似肽分子量。2 ．將P r o - P r 0 - h C m R H ( 1 —似) - G l y —G l y - C y s ，P r o ．h G 卸R H ( 1 —描) 一G l y - G l y - C y s和1 P r o - G H R H ( 2 - - 4 4 ) - O l y - G l y - C y s 無菌注射用水溶解后放入P H = l 1 ．5 堿性環(huán)境中二聚體化4 5 小時(shí)；3 ．

5、將所得9 中G H R t t 類似肽及標(biāo)準(zhǔn)肽h G H R H ( 1 ．4 4 ) ．N H 2 溶解在乳酸鹽林格氏液( L R B ) 中，將S ．D 雌性大鼠2 5 。C 恒溫常規(guī)飼養(yǎng)后，頸椎脫臼法處死，迅速摘取垂體，用無菌L R B 洗凈，立即浸入3 7 1 2 保溫的無菌L R B 液中進(jìn)行活性測(cè)定。每個(gè)垂體放入含有l(wèi) m L 無菌L R B 液的小玻璃管( 1 * 1 0 c m ) 中，3 7 “ C 水浴保溫，每隔1

6、0 m i n 緩慢振搖一次。1 小時(shí)后吸取管中液體，立即補(bǔ)加預(yù)保溫的新L R B 液l m L ，繼續(xù)保溫1 h 。吸出的液體待測(cè)。垂體總共保溫5 小時(shí)( 依次以P 1 、P 2 、1 3 、1 4 、1 5 表示連續(xù)的5 h 時(shí)間段) ，前兩小時(shí)( P 1 、P 2 ) 為空白L R B 緩沖液，后三小時(shí)( 1 3 、1 4 、1 5 ) 垂體加入相同濃度的各種人G H R H 肽．L R B緩沖液。以上均在3 7 1 2 保溫的條