銀(Ⅲ)配合物-魯米諾流動注射化學(xué)發(fā)光新體系測定腎上腺素及多巴胺的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：在日常生活中，應(yīng)激原經(jīng)常作用機(jī)體，機(jī)體就會對應(yīng)激原做出積極反應(yīng)。如果應(yīng)激原的作用不過于強(qiáng)烈，應(yīng)激反應(yīng)將有利于調(diào)動機(jī)體潛能，促進(jìn)機(jī)體完成艱巨的任務(wù)或者更好地避開可能發(fā)生的危險，這種應(yīng)激反應(yīng)是有利的。如果應(yīng)激原過于強(qiáng)烈或持久，將引起機(jī)體的功能代謝紊亂及組織器官損傷，這種應(yīng)激反應(yīng)對身體是有害的。創(chuàng)傷常常作為一種強(qiáng)烈的應(yīng)激原作用于機(jī)體，引起機(jī)體發(fā)生胃、十二指腸黏膜的糜爛、淺潰瘍、應(yīng)激性心律失常、應(yīng)激性心臟病、心肌梗死等疾病，這些疾病的發(fā)生

2、及發(fā)展和機(jī)體應(yīng)激時體內(nèi)兒茶酚胺水平密切相關(guān)。如果能建立一種簡單、快速檢測血液中兒茶酚胺的濃度，以及建立兒茶酚胺于應(yīng)激性疾病的相關(guān)性，進(jìn)而我們通過有效干預(yù)措施對應(yīng)激性疾病進(jìn)行干預(yù)，降低應(yīng)激性疾病的發(fā)生，保護(hù)正常的應(yīng)激反應(yīng)。流動注射化學(xué)發(fā)光作為一種新的檢測手段，越來越廣泛的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，它具有設(shè)備簡單、靈敏度高、檢測范圍寬、選擇性好、反應(yīng)條件易于控制等優(yōu)點(diǎn)。銀（Ⅲ）配合物-魯米諾流動注射化學(xué)發(fā)光新體系較其他魯米諾發(fā)光體系靈敏度高、檢測范圍

3、寬、檢測線低，為此，我們首先建立了測定腎上腺素和多巴胺的一種簡單、快速的檢測方法。
　　 方法：兒茶酚胺主要有三種：多巴胺、腎上腺素、去甲腎上腺素。本實(shí)驗(yàn)建立了多巴胺及腎上腺素的檢測方法，
　　 本研究分為兩部分：
　　 第一部分：腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)儲備液制備：準(zhǔn)確稱取一定量腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品，溶于二次蒸餾水中，配制成濃度為2×10-4mol/L標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于4℃冰箱中冷藏。魯米諾溶液制備：稱取0.886g魯米諾純品，溶于

4、7ml1mol/L的NaOH溶液中，用二次蒸餾水定溶至250ml，制成0.020mol/L的魯米諾溶液。二（氫過碘酸）合銀（Ⅲ）配離子[Ag（HIO6）2r按文獻(xiàn)合成。四個流路分別為載流、魯米諾溶液、Ag（Ⅲ）溶液及樣品溶液。蠕動泵起動后，混合溶液即可流入流通池，所產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光被記錄下來。在基線穩(wěn)定后，將腎上腺素溶液注入載流中，并與Ag（Ⅲ）和魯米諾混合反應(yīng)液流相混合。對應(yīng)于不同腎上腺素濃度下的CL信號強(qiáng)度（峰強(qiáng)度減去基線信號強(qiáng)度）用

5、于繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。利用銀（Ⅲ）配合物-魯米諾流動注射化學(xué)發(fā)光體系測定針劑中腎上腺素的含量。
　　 第二部分：多巴胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液制備：準(zhǔn)確稱取一定量多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品，溶于二次蒸餾水中，配制成濃度為5.27×10-4mol/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于4℃冰箱中冷藏。魯米諾溶液制備：稱取0.886g魯米諾純品，溶于7ml1mol/L的NaOH溶液中，用二次蒸餾水定溶至250ml，制成0.020 mol/L的魯米諾溶液。二（氫過碘酸）合銀（Ⅲ）配離

6、子[Ag（HIO6）2]5-按文獻(xiàn)合成。四個流路分別為載流、魯米諾溶液、Ag（Ⅲ）溶液及樣品溶液。蠕動泵起動后，混合溶液即可流入流通池，所產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光被記錄下來。在基線穩(wěn)定后，將多巴胺樣品溶液注入載流中，并與Ag（Ⅲ）和魯米諾混合反應(yīng)液流相混合。對應(yīng)于不同多巴胺濃度下的CL信號強(qiáng)度（峰強(qiáng)度減去基線信號強(qiáng)度）用于繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。再利用銀（Ⅲ）配合物-魯米諾流動注射化學(xué)發(fā)光體系測定針劑中多巴胺的含量。
　　 結(jié)果：采用銀（Ⅲ）配

7、合物-魯米諾流動注射化學(xué)發(fā)光體系測定腎上腺素，流速為2.5ml/min，以去離子水作載流，魯米諾溶液選擇2.0×107mol/L，魯米諾溶液的堿度為0.0050mol/L，Ag（Ⅲ）溶液濃度為1.0×10-5 mol/L， Ag（Ⅲ）溶液堿度為0.040mol/L，測定腎上腺素的檢出限為8.0×10-10mol/L，腎上腺素的濃度在1.0×10-9-1.0×10-7 mol/L范圍內(nèi)，化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度（I）與其濃度（C）之間呈良好的線性關(guān)

8、系，校準(zhǔn)曲線的回歸方程為I=-88.4+1843.6×108 C（r=0.9991）；本方法的檢出限（3σ）為8.0×10-10 mol/L。對濃度為1.5×10-8 mol/L的腎上腺素進(jìn)行11次平行測定，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差2.9％。銀（Ⅲ）配合物-魯米諾流動注射化學(xué)發(fā)光新體系測定多巴胺，流速為2.5ml/min，以去離子水作載流，魯米諾溶液選擇2.0×10-7mol/L，魯米諾溶液的堿度為0.0050mol/L，Ag（Ⅲ）溶液濃度為2.5

9、×10-5 mol/L， Ag（Ⅲ）溶液堿度為0.040mol/L，測定多巴胺的檢出限為3.0×10-11mol/L，多巴胺的濃度在1.0×10-10-4.0×10-8 mol/L范圍內(nèi)，化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度（I）與其濃度（C）之間呈良好的線性關(guān)系，校準(zhǔn)曲線的回歸方程為I=22.47+1139.42×109 C（r=0.9996）；本方法的檢出限（3σ）為3.0×10-11 mol/L。對濃度為1.0×10-8 mol/L的多巴胺進(jìn)行11次平

10、行測定，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差2.3％。
　　 討論：流動注射技術(shù)、魯米諾化學(xué)發(fā)光體系和Ag（Ⅲ）絡(luò)合物聯(lián)用組成的一系列測定方法，本方法較文獻(xiàn)測定腎上腺素及多巴胺采用的高效液相色譜法、熒光法、電化學(xué)法以及其它流動注射法更加靈敏。此方法檢測方法設(shè)備簡單（沒有光源和單色儀）、價格便宜、檢出限低、線性范圍寬、響應(yīng)速度快以及混合樣品可重復(fù)處理等，為我們進(jìn)一步研究兒茶酚胺與創(chuàng)傷應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展研究做好了技術(shù)基礎(chǔ)，進(jìn)而對我們進(jìn)行有效的干預(yù)