腎樂軟膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性腎病綜合征大鼠的干預(yù)作用.pdf

1、研究目的： 本研究通過建立氨基核苷嘌呤霉素(PAN)腎病綜合征動(dòng)物模型，應(yīng)用腎樂軟膠囊不同劑量對(duì)該模型進(jìn)行干預(yù)性治療，通過觀察氨基核苷嘌呤霉素腎病綜合征大鼠模型24小時(shí)尿蛋白、血清蛋白、血脂、腎功能、腎臟病理形態(tài)學(xué)以及腎組織中TGF-β<,1>表達(dá)的改變，研究腎樂軟膠囊防治腎病綜合征的作用及其可能機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供可靠的研究基礎(chǔ)。 方法： 選用健康雄性Wistar大鼠(清潔級(jí))60只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，

2、檢測(cè)尿蛋白和尿紅細(xì)胞均為陰性。按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、腎樂軟膠囊低劑量組(低劑組)、腎樂軟膠囊中劑量組(中劑組)、腎樂軟膠囊高劑量組(高劑組)、雷公藤多苷組，每組10只。除正常組外，其余各組大鼠腹腔注射1％戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，做頸靜脈插管，一次性頸靜脈注射PAN50mg/Kg，推注時(shí)間為5分鐘。造模第5天后，檢測(cè)尿蛋白定量>1.5g/L、定性在++或以上者即確定為模型大鼠，治療從注射PAN后開始，連續(xù)30天。首次造模后第

3、13、16、19天尾靜脈加強(qiáng)注射PAN 5mg/Kg體重。雷公藤多苷組給予雷公藤多苷9.45mg/kg/d，中劑組按人與大鼠體表面積換算的等效劑量6.48g/kg/d灌胃，低劑組和高劑組分別按2.16g/kg/d，19.48g/kg/d灌胃給藥，正常組和模型組灌服等量蒸餾水。各組動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。于實(shí)驗(yàn)第5，10，15，20，25，30天留取大鼠24小時(shí)尿液進(jìn)行24小時(shí)尿蛋白定量測(cè)定。用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠血清總蛋白(TP)、

4、白蛋白(Alb)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)。第31天殺檢動(dòng)物。光鏡、電鏡下觀察各組大鼠腎小球基底膜及足突的變化情況，免疫組化法檢測(cè)TGF-β<,1>在腎小管及腎間質(zhì)的表達(dá)情況，并用病理圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果： (1)24小時(shí)尿蛋白定量：實(shí)驗(yàn)第5天，除正常組外，其余各組均出現(xiàn)大量蛋白尿，與正常組相比均有顯著性差異(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)第10，15，20，25，30天

5、，中劑量、高劑量和雷公藤多苷組尿蛋白定量均明顯降低，與模型組相比有顯著性差異(P<0.01)，低劑量組尿蛋白雖有所下降，但與模型組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，高劑量組與雷公藤多苷組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 (2)實(shí)驗(yàn)第31天各組生化指標(biāo)檢測(cè)：模型組血清TP、Alb較正常組明顯降低(P<0.01)；中劑量組、高劑量組和雷公藤多苷組血清TP、Alb與模型組相比明顯升高(P<0.01)，低劑量組TP、Alb雖比模型組低

6、，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；高劑量組血清TP、Alb低于雷公藤多苷組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 (3)模型組與正常組相比，血清TC、TG均明顯增高(P<0.01)；治療組與模型組相比，中劑量、高劑量和雷公藤多苷組血清TC、TG明顯降低(P<0.01)，低劑量TC、TG雖比模型組低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；高劑量組血清TP、Alb高于雷公藤多苷組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。模型組血清BUN、Scr與正常

7、組相比顯著升高(P<0.01)；各治療組與模型組相比，中劑量組、高劑量組和雷公藤多苷組血清BUN、Scr明顯降低(P<0.01)，低劑量BUN、Scr雖比模型組低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；高劑量組血清BUN、Scr高于雷公藤多苷組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 (4)腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察：模型組光鏡下見腎小球局灶節(jié)段性硬化，近曲小管上皮細(xì)胞變性腫脹，部分小管腔內(nèi)可見蛋白管型，間質(zhì)可見纖維增生；電鏡下基底膜增厚，結(jié)構(gòu)模

8、糊，腎小球上皮細(xì)胞足突廣泛融合，甚至足細(xì)胞脫落。治療組與模型組相比，低劑量組病理改變不明顯，光鏡下仍見腎小球局灶節(jié)段性硬化，腎間質(zhì)纖維化；電鏡下可見足突廣泛融合，基底膜增厚，結(jié)構(gòu)模糊；中劑量組光鏡下見腎小球硬化及腎間質(zhì)纖維化明顯減輕，電鏡下見足突少量融合，腎小球基底膜結(jié)構(gòu)基本完整。高劑量組及雷公藤多苷組光鏡下僅見部分腎小球局灶節(jié)段硬化，系膜輕度增生，腎小管基本正常，電鏡下僅有少量足突融合，基底膜結(jié)構(gòu)基本正常。 (5)腎組織中TG

9、F-β<,1>免疫組化結(jié)果：正常組動(dòng)物的腎組織中，TGF-β<,1>僅在部分腎小管及腎小球有弱陽(yáng)性表達(dá)，腎間質(zhì)幾乎無(wú)表達(dá)。模型組可見腎小管及腎間質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)明顯(P<0.01)。低劑量組腎小管及腎間質(zhì)仍有明顯表達(dá)；中劑量組腎小管及腎間質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)明顯減弱；高劑量組及雷公藤多苷組中，腎間質(zhì)和腎小管仍有表達(dá)，但與模型組相比表達(dá)明顯減弱(P<0.01)。 結(jié)論： 1 腎樂軟膠囊可降低腎病綜合征大鼠尿蛋白、提高血漿蛋白、改善脂代謝、