CpGODN對鴨源新城疫病毒流行株(SD03)滅活苗免疫增強(qiáng)效應(yīng)研究.pdf

1、CpG寡脫氧核苷酸（CpG oligonucleotide，CpG ODN）是含有未甲基化的CpG二核苷酸基序的核苷酸序列，能夠激活機(jī)體Toll樣受體（toll-like receptor，TLR）9或21，促進(jìn)機(jī)體B細(xì)胞增殖分化，誘導(dǎo)相關(guān)免疫細(xì)胞（自然殺傷（NK）細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、T細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等）的活化及細(xì)胞因子的表達(dá)，產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)級聯(lián)反應(yīng)，從而誘生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。不僅如此，CpG ODN在臨床和生產(chǎn)中亦可作為免疫治療劑

2、和免疫增強(qiáng)劑。已有研究表明，CpG ODN具有種屬特異性且構(gòu)效關(guān)系緊密，對不同疫苗的免疫增強(qiáng)效果亦有差別，篩選得到能夠有效增強(qiáng)當(dāng)前NDV流行株疫苗免疫效果的佐劑是本研究的目標(biāo)。
　　依據(jù)CpG ODN的設(shè)計和優(yōu)化原則，人工合成了9條硫代修飾的序列用于體外篩選。為了避免序列硫代修飾的非特異性的細(xì)胞毒性作用，首次建立了體外篩選CpG ODN的雞胚成纖維細(xì)胞（chicken embryo fibroblast,CEF）模型，并與傳統(tǒng)的淋

3、巴細(xì)胞篩選體系進(jìn)行比較，結(jié)果表明，CEF的耐受性更強(qiáng)，并能夠正確體現(xiàn)CpG ODN的構(gòu)效關(guān)系，初步篩選得到3條CpG ODN活性分子。針對這3條CpG ODN序列，以細(xì)胞增殖率和細(xì)胞因子的表達(dá)量為檢測指標(biāo)，進(jìn)行最佳工作濃度和時間的確定。結(jié)果顯示，CpG ODN6在10μg/mL工作濃度下產(chǎn)生的誘導(dǎo)效應(yīng)與CpG ODN1和CpG ODN4在20μg/mL濃度相當(dāng)。研究結(jié)果為下一步CpG ODN的體內(nèi)篩選和驗證奠定了基礎(chǔ)。
　　將體外

4、篩選的CpG ODN聯(lián)合鴨源新城疫流行株滅活苗進(jìn)行免疫效果增強(qiáng)的評價，并進(jìn)一步篩選確定最佳佐劑。結(jié)果表明，CpG ODN不僅顯著提高了抗體滴度，而且促進(jìn)了相關(guān)受體和細(xì)胞因子的分泌表達(dá)，攻毒保護(hù)率大幅提高。添加CpG ODN的實驗組比疫苗單獨免疫組相比，抗體水平高2~3個滴度，且抗體出現(xiàn)時間提前4天；PBMC表達(dá)的TLR21、IL2、IL6、IL12、IFN-α、IFN-γ均顯著增高；攻毒保護(hù)率達(dá)到100％，明顯高于疫苗單獨免疫組。依據(jù)3