CpGODN對鴨源新城疫病毒流行株(SD03)滅活苗免疫增強效應(yīng)研究.pdf

1、CpG寡脫氧核苷酸（CpG oligonucleotide，CpG ODN）是含有未甲基化的CpG二核苷酸基序的核苷酸序列，能夠激活機體Toll樣受體（toll-like receptor，TLR）9或21，促進機體B細胞增殖分化，誘導(dǎo)相關(guān)免疫細胞（自然殺傷（NK）細胞、樹突狀細胞、T細胞、單核細胞、巨噬細胞等）的活化及細胞因子的表達，產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)級聯(lián)反應(yīng)，從而誘生強烈的免疫反應(yīng)。不僅如此，CpG ODN在臨床和生產(chǎn)中亦可作為免疫治療劑

2、和免疫增強劑。已有研究表明，CpG ODN具有種屬特異性且構(gòu)效關(guān)系緊密，對不同疫苗的免疫增強效果亦有差別，篩選得到能夠有效增強當(dāng)前NDV流行株疫苗免疫效果的佐劑是本研究的目標(biāo)。
　　依據(jù)CpG ODN的設(shè)計和優(yōu)化原則，人工合成了9條硫代修飾的序列用于體外篩選。為了避免序列硫代修飾的非特異性的細胞毒性作用，首次建立了體外篩選CpG ODN的雞胚成纖維細胞（chicken embryo fibroblast,CEF）模型，并與傳統(tǒng)的淋

3、巴細胞篩選體系進行比較，結(jié)果表明，CEF的耐受性更強，并能夠正確體現(xiàn)CpG ODN的構(gòu)效關(guān)系，初步篩選得到3條CpG ODN活性分子。針對這3條CpG ODN序列，以細胞增殖率和細胞因子的表達量為檢測指標(biāo)，進行最佳工作濃度和時間的確定。結(jié)果顯示，CpG ODN6在10μg/mL工作濃度下產(chǎn)生的誘導(dǎo)效應(yīng)與CpG ODN1和CpG ODN4在20μg/mL濃度相當(dāng)。研究結(jié)果為下一步CpG ODN的體內(nèi)篩選和驗證奠定了基礎(chǔ)。
　　將體外

4、篩選的CpG ODN聯(lián)合鴨源新城疫流行株滅活苗進行免疫效果增強的評價，并進一步篩選確定最佳佐劑。結(jié)果表明，CpG ODN不僅顯著提高了抗體滴度，而且促進了相關(guān)受體和細胞因子的分泌表達，攻毒保護率大幅提高。添加CpG ODN的實驗組比疫苗單獨免疫組相比，抗體水平高2~3個滴度，且抗體出現(xiàn)時間提前4天；PBMC表達的TLR21、IL2、IL6、IL12、IFN-α、IFN-γ均顯著增高；攻毒保護率達到100％，明顯高于疫苗單獨免疫組。依據(jù)3