黃瓜綠斑駁花葉病毒遺傳多樣性分析及侵染性克隆的構(gòu)建.pdf

1、黃瓜綠斑駁花葉病毒（Cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV）主要侵染黃瓜、西瓜、甜瓜、葫蘆等葫蘆科作物，造成嚴(yán)重的病害，并在許多國(guó)家造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。CGMMV為我國(guó)的檢疫對(duì)象，在我國(guó)部分地區(qū)都已檢測(cè)到。明確CGMMV的侵染來(lái)源和致病機(jī)理對(duì)于有效控制該病毒的危害具有重要的作用。本研究測(cè)定了山東濟(jì)南和青島 CGMMV分離物的全基因組序列，根據(jù)系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果明確了其來(lái)源，成功構(gòu)建了CGMMV的侵

2、染性克隆。主要結(jié)果如下：
　?。?）獲得了山東濟(jì)南和青島兩個(gè)CGMMV分離物（CGMMV-JN和CGMMV-QD）的全長(zhǎng)基因組序列。序列測(cè)定結(jié)果表明，CGMMV-JN和CGMMV-QD基因組全長(zhǎng)均為6424核苷酸（nt），5′和3′-UTR分別含有60和176 nt，共有4個(gè)開(kāi)放閱讀框（ORF），分別編碼129 kDa和186 kDa復(fù)制酶相關(guān)蛋白、29 kDa移動(dòng)蛋白及17.4 kDa外殼蛋白。
　?。?）多重序列比對(duì)結(jié)果

3、顯示CGMMV-JN與另外CGMMV分離物全基因組核苷酸序列一致率為90.0％~99.7%。重組分析發(fā)現(xiàn)韓國(guó) KOM（AF417243）、以色列 EC（KF155231）、印度（DQ767631）和我國(guó)河北的CHB（KJ658958）4個(gè)分離物在RdRp編碼區(qū)存在重組事件，CGMMV-JN和CGMMV-QD不存在重組事件。選擇壓力分析結(jié)果表明rdrp、mp基因處于負(fù)選擇，cp基因處于正選擇。
　?。?）構(gòu)建了基于全基因組序列的系統(tǒng)

4、進(jìn)化樹(shù)，CGMMV分離物分為3個(gè)組，CGMMV-JN和CGMMV-QD都屬于I組，其中CGMMV-JN與我國(guó)遼寧、臺(tái)灣及日本分離物較近，CGMMV-QD與我國(guó)山東、江蘇及韓國(guó)分離物較近，根據(jù)所用種子來(lái)源及系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果推測(cè)CGMMV-JN和CGMMV-QD可能分別來(lái)源于日本和韓國(guó)。
　　（4）構(gòu)建了可以通過(guò)農(nóng)桿菌浸潤(rùn)接種的CGMMV侵染性 cDNA克隆。通過(guò)融合PCR在 RdRp基因內(nèi)部插入西瓜內(nèi)含子，將 CGMMV-JN基因組